實驗方法原理 多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶,在有氧的條件下,能使一元酚和二元酚氧化產生醌。用分光光度法在525nm波長下測其吸光度,即可計算出多酚氧化酶的活力和比活性。反應式如下:.
實驗材料 馬鈴薯塊莖
試劑、試劑盒 聚乙烯吡咯烷酮磷酸緩沖液磷酸緩沖液和度硫酸銨兒茶酚三氯乙酸
儀器、耗材 UV-1206UV-1240分光光度計離心機恒溫水浴研缽或勻漿機試管移液管紗布袋
實驗步驟
1. 粗酶液的制備
稱取馬鈴薯塊莖5g于研缽中,加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(事先用蒸餾水浸洗,然后過濾以除去雜質)和100 ml 0.1mol·L-1pH6.5磷酸緩沖液,磨成勻漿,用幾層紗布袋過濾,濾液加入30%飽和度硫酸銨,離心除沉淀,上清液再加硫酸銨使達60%飽和度,離心收集沉淀。將所得沉淀溶于2~3 ml 0.01mol·L-1 pH6.5磷酸緩沖液中,即為粗制酶液。
2. 活性酶的測定
在試管中加入3.9 ml 0.05 mol·L-1 pH5.5磷酸緩沖液,1.0 ml 0.1 mol·L-1兒茶酚在37℃恒溫水浴中保溫10min ,然后加入0.5 ml酶液(可視酶活性增減用量),迅速搖勻,倒入比色杯內,于525nm波長處以時間掃描方式,在1~2min內測定吸光度變化(A)值。