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  • 發布時間:2019-04-19 06:45 原文鏈接: 植物根系活力的測定(TTC法)

    實驗概要

    植物根系是活躍的吸收器官和合成器官,根的生長情況和活力水平直接影響地上部的生長和營養狀況及產量水平。本實驗練習測定根系活力的方法,為植物營養研究提供依據。

    實驗原理

    氯化三苯基四氮唑(TTC)是標準氧化電位為80mV的氧化還原色素,溶于水中成為無色溶液,但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲瓚,生成的三苯甲瓚比較穩定,不會被空氣中的氧自動氧化,所以TTC被廣泛地用作酶試驗的氫受體,植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原,可因加入琥珀酸,延胡索酸,蘋果酸得到增強,而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性并作為根系活力的指標。

    主要試劑

    1.乙酸乙酯(分析純)。

    2. 次硫酸鈉(Na2S2O4),分析純,粉末。

    3. 1%TTC溶液 準確稱取TTC1.0g,溶于少量水中,定容到100ml。用時稀釋至各需要的濃度。

    4. 磷酸緩沖液(1/15mol/L,pH7)。

    5. 1mol/L硫酸 用量筒取比重1.84的濃硫酸55ml,邊攪拌邊加入盛有500ml蒸餾水的燒杯中,冷卻后稀釋至1000ml。

    6. 0.4mol/L琥珀酸 稱取琥珀酸4.72g,溶于水中,定容至100ml即成。

    主要設備

    1. 分光光度計;2. 分析天平(感量0.1mg);3. 電子頂載天平(感量0.1g);4. 溫箱;5. 研缽;6. 三角瓶50ml;7. 漏斗;8. 量筒100ml;9. 吸量管10ml;10. 刻度試管10ml;11. 試管架;12. 容量瓶10ml;13. 藥勺;14. 石英砂適量;15. 燒杯10ml、1000ml。

    實驗材料

    水培小麥根系。

    實驗步驟

    1. 定性測定

       1)配制反應液把 1% TTC 溶液、 0.4 mol/L 的琥珀酸和磷酸緩沖液按 1:5:4 比例混合。

       2)把根仔細洗凈,把地上部分從莖基部切除。將根放入三角瓶中,倒入反應液,以浸沒根為度,置 37℃左右暗處放 1~3h ,以觀察著色情況,新根尖端幾毫米以及細側根都明顯地變成紅色,表明該處有脫氫酶存在。

    2. 定量測定

       1)TTC標準曲線的制作

    取0.4%TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中,加少許Na2S2O4粉搖勻后立即產生紅色的甲攢。再用乙酸乙酯定容至刻度,搖勻。然后分別取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含甲攢25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標準比色系列,以空白作參比,在485nm波長下測定吸光度,繪制標準曲線。

       2)稱取根尖樣品0.5g,放入10ml燒杯中,加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml,把根充分浸沒在溶液內,在37℃下暗保溫1~3h,此后加入1mol/L硫酸2ml,以停止反應。(與此同時做一空白實驗,先加硫酸與根樣品,10分鐘以后再加其他藥品,操作同上)。

       3)把根取出,吸干水分后與乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起在研缽內磨碎,以提出甲攢。紅色提取液移入試管,并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌二、三次,皆移入試管,最后加乙酸乙酯使總量為10ml,用分光光度計在波長485nm下比色,以空白試驗作參比測出吸光度,查標準曲線,即可求出四氮唑還原量。

    3. 結果計算

    四氮唑還原強度(mg/g(根鮮重)/h)=四氮唑還原量(mg)/[根重(g)×時間(h)]

    附    件   (共1個附件,占17KB)

    3.jpg

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