植物組織中可溶性糖含量測定（苯酚法）

植物體內的碳素營養狀況以及農產品的品質性狀，常以糖含量作為重要指標；植物為了適應逆境條件，如干旱、低溫，也會主動積累一些可溶性糖，降低滲透勢和冰點，以適應外界環境條件的變化。

一、原理

苯酚法測定可溶性糖原理：

植物體內的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖。苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛（分子式見蒽酮法）能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10～100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，試劑便宜，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，并且產生的顏色可穩定160min以上。

二、材料、儀器設備及試劑

（一）材料：新鮮的植物葉片。

（二）儀器設備：1. 分光光度計；2. 水浴鍋；3. 刻度試管；4. 刻度吸管。

（三）試劑：1. 90％苯酚溶液　稱取90克苯酚（AR），加蒸餾水10ml溶解，在室溫下可保存數月；2. 9％苯酚溶液　取3ml90％苯酚溶液，加蒸餾水至30ml，現配現用；3. 濃硫酸（比重1.84）；4. 1％蔗糖標準液　將分析純蔗糖在80℃下烘至恒重，精確稱取1.000克。加少量水溶解，轉入100ml容量瓶中，加入0.5ml濃硫酸，用蒸餾水定容至刻度；5. 100μg/L 蔗糖標準液　精確吸取1％蔗糖標準液1ml加入100ml容量瓶中，加水至刻度。

三、實驗步驟

1. 標準曲線的制：向試管內加入1ml9％苯酚溶液，搖勻，再從管液正面以5～20S加入5ml濃硫酸，搖勻。比色液總體積為8ml，在室溫下放置30min，比色。然后以空白為參比，在485nm波長下比色，以糖含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，求出標準直線方程。

2. 可溶性糖的提取取：取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取0.10～0.30g，共3份（或干材料），分別放入3支刻度試管中，加入5～10ml蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液過濾入25ml容量瓶中，反復漂洗試管及殘渣，定容至刻度。

3. 測定 吸取0.5ml樣品液于試管中（重復2次），加蒸餾水1.5ml，同制作標準曲線的步驟，按順序分別加入苯酚、濃硫酸溶液，顯色并測定吸光度。由標準曲線查出糖的量。

四、結果計算

按下式計算測試樣品的糖含量：

可溶性糖含量（％）＝從標準曲線查得糖的量（μg）×提取液體積（ml）×稀釋倍數/[測定用樣品液的體積(ml)×樣品重量(g)×106]×100