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  • 實驗方法原理植物體內含有許多種化學物質。在得到植物組織切片之后,可以通過組織化學(顯微化學)染色的方法使不同類型的化學成分在顯微鏡下得以顯示,從而了解這些物質在植物的組織細胞內的空間分布用于組織化學研究的切片,根據研究對象和所要檢測的化學物質的不同,可采用石蠟切片,有時要求新鮮材料采用徒手切片或冰凍切片。在植物組織切片過程中恰當地運用一些簡單的組織化學染色方法,一方面可以確定細胞壁及細胞后含物的化學性質,另一方面也有利于分辨組織和細胞的結構
    實驗材料

    植物組織

    實驗步驟


    (1)纖維素:植物細胞的細胞壁中最主要的成分是纖維素。常用的顯色方法為碘-硫酸法:取 1%的碘-碘化鉀溶液滴加在材料上,冉加 1 滴 66.5%的硫酸,纖維素細胞壁與碘和硫酸作用而變成藍色。在細胞中,纖維素的成分愈多和其他后來參加組成細胞壁的成分愈少,則藍色愈明顯;在次生壁中,纖維素已為木質素等覆蓋,不變藍色。


    (2)木質素:木質素是以苯丙烷為結構單元通過醚鍵-碳鍵彼此連接成具有三維空間結構的高聚物。因為植物細胞壁上的木質都成復合的狀態,木質素的顯微化學方法雖然很多,但一般只能示知其存在的可能性而已。間苯三酚反應是植物顯微化學中確定木質化的最常用和最簡單方法:切片先用 1滴鹽酸浸透,然后,滴上 1 滴 5%-10%的間苯三酚酒精溶液,木質化細胞壁可現出櫻紅色或紫紅色(因顏色會慢慢褪去而不宜制作永久制片)。染色稍為穩固的方法為硫酸苯胺(或鹽酸苯胺)法:在切片上滴上 1 滴硫酸苯胺試劑(硫酸苯胺1g, 蒸餾水 70mL,95%酒精 30mL, 硫酸 30mL), 木質化的細胞壁現出鮮黃色或姜黃色,可制成保持期稍久的永久制片。


    (3) 栓質和角質:栓質和角質都是特種高分子飽和或不飽和脂胺酸的衍生物。用碘-硫酸或碘-氯化鋅法染色,栓質和角質都可顯黃色或淺褐色,但木質、半纖維素等成分也被染成同樣的顏色。用蘇丹Ⅲ或蘇丹 IV)染色,栓質和角質呈現橘紅色反應,不過這種反應也并非栓質和角質的特異性反應。


    (4) 果胺質:果胺是構成高等植物細胞間質的主要物質,主要由 D 一半乳糖醛酸通過α-1,4-糖苷鍵連接。檢測植物細胞中的果胺質常采用釕紅染色法:切片用 0.02% 的釕紅水溶液染色10min, 細胞壁中的果胺成分被染成紅色。釕紅染色時,細胞內的含氮化合物也會著色,但此方法仍不失為檢測果胺的好方法,染色后的切片可以用加拿大樹膠封固為永久制片。

    展開


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