實驗材料 RNA
試劑、試劑盒 TELiCl無水乙醇乙酸鈉氯仿
儀器、耗材 勻漿器離心管離心機水浴鍋
實驗步驟
1. 研缽和研棒先用液氮冷卻，稱出15 g 凍結植物組織于研缽中（加液氮保持凍結）。
2. 用研棒磨成粉末，立即轉移到一個盛有150 ml，研磨緩沖液和50 ml TLE緩沖液平衡酚的500 ml 燒杯中。
3. 用Poltroon勻漿器，設定在5~6擋勻漿2 min，加入50 ml 氯仿，并用勻漿器在低速下混勻。
4. 將混合物移至500 ml 的Nalgene離心瓶中，于50℃加熱20 min。
5. 于4℃用JA-10轉子在17 700 g 下離心20 min。
6. 將上層水相移至另一個干凈Nalgene離心瓶中（界面保留待后繼步驟4處理），加入50 ml TLE緩沖液平衡酚，混勻，再加50 ml 氯仿。
7. 將上步殘余的水相連同界面上的物質移入一 50 ml Oak Ridge離心管中，于4℃用JA-20轉子12 100 g 離心20 min。
8. 吸出水相、與步驟3的水相和酚、氯仿混合物合并，劇烈混和。
9. 于4℃用JA-10轉子17 700 g 離心15 min，水相移入另一干凈500 ml 離心瓶。
10. 用TLE平衡分反復抽提水相，直至兩相間界面干凈為止，水相再以氯仿抽提。
11. 將水相移入250 ml Nalgene離心瓶中，加入LiCl至終濃度為2 mol/l（加約0.33體積的8 mol/l LiCl），在4℃沉淀過夜。
12. 于4℃用JA-14轉子15 300 g 離心20 min，沉淀以2~3 ml，2 mol/l LiCl溶液沖洗。
13. 沉淀以5 ml 水重溶，并移入15 ml Sarstedt 離心管中，加入LiCl溶液至2 mol/l于4℃沉淀RNA 2 h 以上。
14. 于4℃用JA-20轉子15 300 g 離心20 min，用2 mol/l LiCl溶液沖詵一下，重溶干2 ml。
15. 加入200 μl 3 mol/l 乙酸鈉溶液和5.5 ml無水乙醇，-20℃沉淀過夜或在干冰/乙醇中沉淀30 min。
16. 于4℃用JA-10轉子17 700 g 離心15 min，用1 ml 水重溶沉淀，取10 μl 稀釋至1 ml 測A260和A280。