吸附色譜在色譜分離中占有非常重要的地位,只要吸附劑和流動相選擇得當,幾乎可以用來分離所有類型的化合物。目前大多數液一固色譜分離都是以全多孔硅膠為固定相。考慮到柱子的耐久性和可靠性,在常規工廠生產控制和不太困難的分離中,用薄殼型硅膠柱往往是更好的選擇,因為薄殼填料柱易于制備、不容易堵塞,并且容易平衡和再生。對于大量樣品的制備分離,通常采用50μm粒徑的多孔硅膠柱。
若各種流動相使用無效或樣品在硅膠柱中發生反應或損失時,可更換為氧化鋁柱,以改變選擇性。如分析堿性樣品時,一般用氧化鋁柱。
在吸附色譜分離中,需要選擇的第二個條件是流動相。在確定了具有適當強度和選擇性的溶劑之后,就可以使用吸附色譜來分離樣品。對于ε0>0.1值(ε0是溶劑的強度參數,它的物理意義是在特定吸附劑上單位面積溶劑的吸附能)的非水溶性溶劑,可使用50%水飽和的流動相。對于較弱的流動相,可加入0.02~0.1體積的乙腈代替水。而對于水溶性流動相,可加人0.05~0.2體積的水。
關于樣品量,在使用全多孔硅膠柱時,每g吸附劑可注入多達1 mg的樣品。但對于高效柱來說,當樣品量大于50 μg/g時。就可能對分離造成影響。對于容量較小的高效柱(15x0.5 cm,5μm),進樣量一般為25~50μL,而對于較長和較粗的柱子進樣量為50~400μL。除此之外,還要考慮溫度的影響,如果保留時間必須控制在嚴格的范圍之內,柱子應恒溫在室溫附近 [1] 。