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  • 發布時間:2020-07-13 15:29 原文鏈接: 正常人羊膜細胞(HAM)原代細胞培養

    PriCells: 正常人羊膜細胞(HAM)原代細胞培養

    實驗材料:
    1. 人胎盤;
    2. PBSA/GASP:含抗生素的PBSA(慶大霉素,50μg/ml;兩性霉素B,1.25μg/ml;鏈霉素100μg/ml;青霉素100U/ml);
    3. 丙三醇;
    4. 含50%丙三醇的DMEM;
    5. 胰蛋白酶/EDTA;
    6. Millicell微孔膜組織培養插片;
    7. 塑料刮片和無菌棉拭子;

    實驗方法:
    1. 用PBSA/GASP清洗組織;
    2. 分離人羊膜,用戴手套的手從胎盤上將羊膜鈍性分離下來,分離出的羊膜薄層包括上皮細胞,基底膜和一些基質組織;
    3. 用無菌棉拭子除去基底膜下的基質組織,使分離的羊膜盡可能的薄;
    4. 在監測供者血清以除外疾病的時期,可以將粗分離出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中,-70℃存放;
    5. 臨用前解凍人羊膜,用PBSA清洗后將其切成直徑約為2mm的小塊;
    6. 用胰蛋白酶/EDTA消化組織塊,37℃,30min;
    7. 用塑料刮片輕刮消化過的人羊膜,除去上皮細胞,注意不要破壞基底膜;
    8. 用PBSA清洗裸露的羊膜,并將它的基底膜面(去除上皮細胞的面)黏附在Millicell微孔膜組織培養插片上;

     


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