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  • 發布時間:2020-09-14 22:18 原文鏈接: 正常人羊膜細胞(HAM)原代細胞培養

    實驗材料:
    1.人胎盤;
    2.A/GA:含抗生素的A(慶大霉素,50μg/ml;兩性霉素B,1.25μg/ml;鏈霉素100μg/ml;青霉素100U/ml);
    3.丙三醇;
    4.含50%丙三醇的DMEM;
    5.胰蛋白酶/EDTA;
    6.Millicell微孔膜組織培養插片;
    7.塑料刮片和無菌棉拭子;

    實驗方法:
    1.用A/GA清洗組織;
    2.分離人羊膜,用戴手套的手從胎盤上將羊膜鈍性分離下來,分離出的羊膜薄層包括上皮細胞,基底膜和一些基質組織;
    3.用無菌棉拭子除去基底膜下的基質組織,使分離的羊膜盡可能的薄;
    4.在監測供者血清以除外疾病的時期,可以將粗分離出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中,-70℃存放;
    5.臨用前解凍人羊膜,用A清洗后將其切成直徑約為2mm的小塊;
    6.用胰蛋白酶/EDTA消化組織塊,37℃,30min;
    7.用塑料刮片輕刮消化過的人羊膜,除去上皮細胞,注意不要破壞基底膜;
    8.用A清洗裸露的羊膜,并將它的基底膜面(去除上皮細胞的面)黏附在Millicell微孔膜組織培養插片上。

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