實驗材料:
1.人胎盤;
2.A/GA:含抗生素的A(慶大霉素,50μg/ml;兩性霉素B,1.25μg/ml;鏈霉素100μg/ml;青霉素100U/ml);
3.丙三醇;
4.含50%丙三醇的DMEM;
5.胰蛋白酶/EDTA;
6.Millicell微孔膜組織培養插片;
7.塑料刮片和無菌棉拭子;
實驗方法:
1.用A/GA清洗組織;
2.分離人羊膜,用戴手套的手從胎盤上將羊膜鈍性分離下來,分離出的羊膜薄層包括上皮細胞,基底膜和一些基質組織;
3.用無菌棉拭子除去基底膜下的基質組織,使分離的羊膜盡可能的薄;
4.在監測供者血清以除外疾病的時期,可以將粗分離出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中,-70℃存放;
5.臨用前解凍人羊膜,用A清洗后將其切成直徑約為2mm的小塊;
6.用胰蛋白酶/EDTA消化組織塊,37℃,30min;
7.用塑料刮片輕刮消化過的人羊膜,除去上皮細胞,注意不要破壞基底膜;
8.用A清洗裸露的羊膜,并將它的基底膜面(去除上皮細胞的面)黏附在Millicell微孔膜組織培養插片上。