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  • 發布時間:2020-07-13 23:11 原文鏈接: 正常大兔主動脈平滑肌細胞培養

    實驗材料:

    1. 正常大兔主動脈

    2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2

    3. 消化液:0.125%胰蛋白酶,0.1%膠原酶Ⅰ

    4. 細胞培養瓶(T25)

    5. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷

    6. 網篩(100目)

    7. 離心管(15ml、50ml)


    實驗方法:

    1. 處死大兔,分離出主動脈,放入預冷的含雙抗的1×PBS(pH=7.2)反復清洗3次。以洗去表面血絲和粘膜;

    2. 將清洗過的大動脈剪成2.5~75px的血管段,剝離外膜;

    3. 將去外膜的血管段放入培養皿中,縱向剪開管壁,然后使內膜朝上,用小刀片輕輕刮去內膜細胞。加1×PBS洗滌中膜3次,將中膜剪成1mm3的組織塊;

    4. 將組織塊移入50ml離心管中,加入適量0.1%膠原酶Ⅰ溶液,在37℃恒溫箱中消化1~3h,至組織塊成絮狀為止;

    5. 1000r/min,離心5min,去上清。再加入0.125%胰蛋白酶溶液,37℃水浴中攪拌消化5~10min。用含血清的培養基終止消化,吸管輕輕吹打2-3min,以得到分散的平滑肌細胞;

    6. 過100目網篩,收集濾液,1000r/min離心5min,棄上清;

    7. 加培養液重懸細胞、調整細胞濃度至1×105個/ml,接種于培養瓶中,置于37℃、5%CO2的培養箱中培養;

    8. 兩天后第一次換液,之后每天換液一次;

    9.PriCells-原代平滑肌細胞細胞特制基礎培養基

    10.PriCells-原代平滑肌細胞細胞培養特制添加劑

    11.PriCells-原代細胞分離試劑盒

    12.PriCells-原代細胞鑒定試劑盒


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