比色法測定血清乳酸脫氫酶（LDH）實驗

一、 實驗試劑：

1. 底物緩沖液（含0.3mol/L乳酸，PH8.8）：

稱取二乙醇胺2.1g，加蒸餾水約80ml，以1mol/L鹽酸調節至PH8.8，加水至100ml。

2. 11.3mmol/L NAD溶液：稱取NAD15mg（含量為70％，則稱取21.4mg）溶于2ml蒸餾水中，4℃保存至少可用2周。

3. lmmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液：稱取2，4-二硝基苯肼198mg加10mol/L鹽酸100ml，待溶解后加蒸餾水至1000ml，置棕色玻璃瓶，室溫中保存。

4. 0.4mol/L NaOH溶液

5. 0.5mmol/L丙酮酸標準液：準確稱取丙酮酸鈉（標準品級MW=110.06）11mg，以底物緩沖液溶解后，移入200m1容量瓶，加底物緩沖液稀釋至刻度，臨用前配制。

二、 實驗操作：取16mm×100mm試管，按表操作

室溫放置5分鐘后，波長440 nm，比色杯光徑 1.0 cm，用B溶液調零，讀取各管吸光度，并與相應的酶活力單位數繪制標準曲線。

金氏單位定義：以100 ml 血清，37℃作用15 min，產生1微摩爾丙酮酸為一個單位。

參考值：190 - 437  金氏單位

1. LDH只作用L-乳酸，如用L-乳酸鈉，只用DL-乳酸

2. 草酸鹽只能抑制乳酸脫氫酶的活力，故不能用草酸鉀作為抗凝劑的抗凝血來測定方法。

3. 紅細胞內LDH活力較血清中約高100倍，故溶血標本不能測定。

4．結果高于2500單位時，將血液稀釋后測定，結果乘以稀釋倍數。

5. 比色應在5-15分鐘內完成，否則吸光度降低。