毛細管電泳色譜儀電動進樣是當在毛細管的進樣端浸入樣品溶液并加上電場E時,組分因電泳和電滲作用而進入毛細管內。由于毛細管內徑很小,對進樣技術要求很高,進樣區帶寬度約是毛細管柱長的1%~2%,不能引入顯著的區帶擴張,以確保系統的;樣品量必須<100nL,否則易造成過載。
一、進樣方法:
毛細管洗凈后,用微量注射器注入緩沖液,然后將其兩端分別浸入兩個盛有緩沖液的儲瓶。電動進樣時,將含樣品溶液的儲瓶代替一端的緩沖液儲瓶,通過樣品溶液引入進樣電壓(為分離電壓的1/5~1/3),電路按一定時間周期接通,一般是幾秒鐘接通一次,使進入毛細管的樣品區帶變窄。然后斷電,將緩沖液儲瓶代替樣品溶液瓶,再通入高壓電,使電泳開始。為使電壓沿管線分布均勻,應使樣品溶液與緩沖液的電導率相近。
二、進樣質量:
電動進樣時,在時間t內,進入毛細管的樣品質量Q為:
Q =πr2(vep + veo)Ct
= πr2(μep + μeo)ECt
= πr2(μep + μeo)VCt/L
式中:r為毛細管內徑,V為毛細管兩端的電壓,L為毛細管總長度,C為樣品濃度。
電動進樣的控制參數是電場強度E和進樣時間t。其中E通常為1~10kV/60cm;t通常為1~10s,有時可達60s或更大。
三、特點:
1、優點:
(1)電動進樣對毛細管內的填充介質沒有限制,屬普適性進樣方法,可實現自動化操作。
(2)進樣裝置簡單。
(3)適用于荷電樣品進樣,特別適合粘度大的樣品。
(4)電動進樣是毛細管凝膠電泳的*進樣方式。因為在凝膠狀態下,壓力進樣和擴散進樣都很困難。
(5)可用于痕量富集。但樣品溶液的離子強度必須保持恒定,否則在該點的電壓會急劇變化。
2、缺點:
電動進樣對離子組分存在偏向,淌度大的離子比淌度小的離子的進樣量大,淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進不去,而降低分析的準確性和可靠性。