流式細胞術（FCM）簡介

流式細胞儀是測量染色細胞標記物熒光強度的細胞分析儀，廣泛應用于基礎臨床研究和臨床實踐各個方面， 希望我們的工作能給您的科研和臨床診治帶來一定的幫助，  也希望您能給與我們的工作一定的支持！檢測項目有：1，淋巴細胞亞群 2，HLA-B27  3，白血病免役分型    4，DNA倍體分析 5，血小板活化

1，  淋巴細胞亞群（NK， CD19， CD3， CD4， CD8）：即人體的免役功能，那么，什么是免役呢？通俗的講就是識別自身與非自身成分的生理功能。人體通過免役系統之間的相互調節而保持平衡，是多系統共同參與的復雜過程。人體免役功能表現為：1，對外來病原微生物及毒素的免役防御；2，機體不斷的清除衰老細胞的免役自穩；3，抗腫瘤等的免役監視。在這里主要談論一下免役防御，即抗感染免役。抗感染，清除非己成分是機體免役系統最基本的功能之一。實際上，感染的結局與微生物的種類、侵入途徑、數量及寄生的部位有關，但更重要的是取決于機體免役系統的功能狀態。而免役系統在免役應答過程中起核心作用的是淋巴細胞。淋巴細胞根據其生物功能和細胞抗原的表達可以分為三大類：B細胞、T細胞和NK細胞。

NK細胞，即自然殺傷細胞，在抗病毒免役中發揮著重要的作用，當病毒感染后，在免役監視中起重要作用的NK細胞首先反應，一方面，NK細胞產生的細胞因子如IFN-r等對機體免役功能進行調節。同時也是評估人體非特異性免役狀態的有用指標，其意義相當于補體系統的檢測，尤其是病毒感染和腫瘤中。

T（CD3+）淋巴細胞主要參與細胞免役，根據其不同的功能特性分為輔助/誘導T淋巴細胞（+徹底）和抑制/細胞毒T淋巴細胞（CD8+）。CD4+能促進B細胞T細胞和其他免役細胞的增殖與分化，協調免疫細胞間相互作用；CD8+代表抑制性T細胞和殺傷性T細胞。抑制性T細胞為協調性T細胞，殺傷性T細胞主要識別存在于靶細胞表面上的MHC—1類分子與抗原結合的復合物，如被病毒感染的靶細胞或癌細胞等，因此于抗病毒抗腫瘤免疫有關。

B淋巴細胞主要參與體液免疫。正常人體內，淋巴細胞極其亞群保持著一定的平衡，并相互協調，以發揮各自的作用。如果說抗感染免疫中以何種免疫為主，則因感染的微生物而異。一般來說，抗體不易進入細胞內，只能對胞外感染的病原微生物起作用，所以體液免疫在胞外感染中起重要作用，而消滅胞內病原體主要靠細胞免疫發揮作用。

 以前，絕大多數醫院只有體液免疫的一些常規項目開展，無法了解整體的免疫狀態。但隨著科技的發展，尤其流式細胞儀投入臨床應用以來，淋巴細胞亞群及各種細胞因子檢測項目的發展迅速，為我們提供了新的臨床診斷學的常規模式，即臨床醫生在獲得每一個病人免疫狀態的客觀評估后，“祛邪與扶正”相結合的綜合治療將安排更加合理，更加有的放矢。

 檢測項目有：CD19、CD3、CD4、CD8、NK細胞檢測和CD4/CD8的比值，因CD4和CD8這兩組細胞在T細胞網絡中處于調節樞紐位置。在許多病理情況下其數量和比值可以發生變化，其變化不但反映T細胞棉衣功能也間接反映了體液免疫狀況。濟南市中心醫院中心實驗室流式項目開展工作近三年來，檢測的千余例標本也驗證著并促進著臨床免疫學的發展。

 在國內，臨床上長為慢性感染、反復感染、不常見的病原體感染、感染期不完全清楚或對癥治療不完全應答的病人做全套的淋巴細胞亞群，也應用于腫瘤病人、移植病人和和風濕病人的診斷及療效的判定。

 國際上，淋巴細胞及其亞群即上述最為成熟的一組項目是人體免疫監控指標，是美國FDA認證的健康項目查體之一，從而為人們了解自身免疫狀態和抵御疾病增添了新的途徑。

標本： 肝素鈉或EDTA抗凝的全血

2.HLA—B27

     強直性脊柱炎（ANKY LOSING SPONDY LITIS，AS）是目前已知與HLA 有強關聯的一種疾病。在過去的20年中，大量不典型AS通過HLA—B27檢測而證實，HLA—B27已列入有價值的臨床診斷工具，由于方法學因素，該檢測技術未得到擴大。鑒于HLA—B27檢測對眾多脊柱關節病的診斷有舉足輕重的作用，因此方法學的選擇就顯得尤為重要。

      常規檢測HLA—B27的方法是由TEARSKI和MCCLELLAND提出的微量細胞淋巴毒實驗。其基本原理是：標準抗血清中含有細胞毒抗體，與待測細胞表面相應的HLA抗原結合，激活隨后加入的補體，使細胞損傷或裂解，再利用染料排斥實驗，通過顯微鏡判斷受檢細胞的活性。整個實驗過程時間長，勞動強度大，且由于抗血清是由經產婦提供的的多克隆抗體，因此其靈敏度和特異性都很難達到100%，此外還需專門的技術人員來解釋實驗結果，因而普及困難。

      單克隆抗體和熒光素的開發使的流式細胞術在各個領域得到空前的發展，多參數同時測定使得流式細胞數得以快速、靈敏、特意地測定某一特定細胞群中的某一特定抗原的表達。與傳統方法相比，流式細胞數來檢測HLA—B27的表達，無須分離淋巴細胞、操作簡單、自動化程度高、靈敏度達100%、特意性達97.4%、結果穩定、樣本之間、不同儀器之間、不同實驗室之間可重復性高。

      科技的發展使我們在應用流式細胞數測HLA—B27的基礎上又有新的飛躍，HLA—B27試劑盒與HLA—B27自動軟件配套使用，為我們提供了一種快速、準確的檢測病人T淋巴細胞表面的HLA—B27抗原表達的方法。試劑盒中的單克隆抗體不僅可于所有已知的HLA—B27亞型結合，還會于HLA—B27發生交叉反映，少數情況下與它HLA—B等位基因的產物也能結合。由于T細胞只表達HLA—1類抗原，所以通過分析T淋巴細胞上的抗HLA—B27FITC平均熒光強度就能最大限度地減少檢測的假陽性，將HLA—B27或其它交叉反應陽性而HLA—B27陰性的樣本與確實表達HLA——B27的樣本區別開來。

標本： 肝素鈉或EDTA抗凝的全血

3白血病免疫分型

形態學分型是白血病分型的的基礎，白血病免疫分型是白血病分型的的重要補充和進一步深化，國際白血病MIC分型協作組認為免疫分型對每一例急性白血病都是必不可少的對下列情況意義更大：1.形態學，細胞學染色不能肯定細胞來源的白血病。2.形態學為急性淋巴細胞白血病或急性未分化白血病但缺乏特異性淋巴細胞系列抗原標記。3.混合性白血病。4.部分髓系白血病。5.慢性淋巴細胞白血病。

標本： 肝素鈉或EDTA抗凝的全血或骨髓

4. DNA倍體分析

DNA非整倍體的出現可能是癌前病變發生早期癌變的一個重要指標， DNA倍體分析結合臨床病理的形態學診斷，可對一些不易被早期發現的惡性腫瘤進行早期診斷，跟蹤隨訪和早期治療，進而大大提高了一些腫瘤的治愈率和生存率，尤其是對一些細胞抽吸物，體液，組織液懂得脫落細胞進行DNA倍體分析，意義更加重大，與正常組織細胞相對的DNA含量有5%的變化就可以被流式細胞儀很清晰地分辨出，而此時，形態學往往還沒有明顯的變異。FCM可以提供確切的診斷信息， 流式細胞術對于淋巴瘤的早期診斷具有比形態學更為敏感， 準確的優點。 形態學表現為良性腫瘤， 出現非整被體提示有惡性轉變的可能； DNA指數可作為判斷間葉組織腫瘤良惡性的輔助指標。

標本： 肝素鈉或EDTA抗凝的全血， 體液， 組織灌洗液

5．血小板活化

  流式細胞儀檢測血小板活化采用全血標本， 因全血標本中的血小板更接近生理狀態， 操作簡單， 減少由于操作造成的血小板狀態改變（如血小板活化）， 同時檢測血小板的多個標志物， 結合FSC和SSC， 評估多個參數， 進行定量分析， 多采用血小板特異抗體CD41或CD61畫門， 找出血小板， 避免雜志碎片干擾， 檢測血小板亞群靈敏度高， 用血量少， 無放射污染。

檢測項目：1PAC—1：早期PLT活化的標志物， 即活化的gpII/IIIa復合物， 抗體與活化PLT膜表面的gpII/IIIa復合物。

2 CD62P：PLT活化后期的標志物， 特異德育活化的PLT結合， 靜止的PLT胞漿內顆粒含有CD62P， PLT活化后， 顆粒內糖蛋白內膜外釋放， PLT表達CD62P。

3 CD61：特異的泛血小板表面標記， 即于活化后的血小板結合， 也于為活化的血小板結合， CD61與CD41聯合， 即為血小板表面gpIIb/IIIa復合物。

臨床應用：

1．  缺血性冠狀動脈疾病： 若心絞痛， 心肌梗塞， 血管成形術， 心肺旁路術等

2．  缺血性腦血管病： 如腦梗塞， TIA， 腦動脈硬化等

3．  糖尿病， 惡性腫瘤

4．  高血壓， 高脂蛋白血癥， 高粘滯血癥

5．  抗血小板藥物機制研究與療效檢測

6．  吸煙， 情緒應急

標本： 枸櫞酸鈉抗凝的全血2ml