流式細胞計量術（DNA含量）實驗

細胞

PBS 冷乙醇 PI 溶液

錐形管

1. 分離細胞并移至 15 ml 的錐形管中。檢查有單個細胞懸浮，1000 g 離心 5 分鐘，棄上清。

2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 將細胞洗 2 次，計數細胞總數，記在管山。

3. 用約 500 μl 的 PBS 重懸細胞。

4. 加 5 ml 冷乙醇，4℃ 固定過夜。

5. 取 5X10⁶ 細胞放入 15 ml 錐形管中，1000 g 離心，棄乙醇。

6. 懸攪沉淀，用 5 ml PBS+1% BSA 或小牛血清洗 2 次。

7. 用含 1% BSA 或 1% 小牛血清的 800 μl PBS 重懸細胞沉淀。

8. 加 100 μl 10X PI 溶液。

9. 加入 100 μl 煮沸過的 RNA 酶 A，37℃ 孵育 30 分鐘。

10. 用流式細胞計量術分析固定的樣品。