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  • 發布時間:2021-05-14 15:05 原文鏈接: 淺談血栓與止血試驗診斷的現狀與發展

        近十幾年來,隨著血栓性疾病與出血性疾病在人類疾病譜中地位的變化及防治研究的迅速進展,血栓與止血的實驗診斷技術也不斷有新的發展并在全國逐步普及。

       血栓與止血試驗的標準化

       血栓與止血試驗的標準化是指對檢測標本、試劑、儀器、技術和操作等制定統一標準,按照標準的要求對試驗進行科學管理,以減少誤差,提高試驗的精密度、準確性和可靠性。由于血栓與止血試驗的特殊性,迄今關于血小板功能、抗凝因子、纖溶成分的檢測尚缺乏成熟的標準化方案,僅在凝血酶原時間(PT)、活化的部分凝血活酶時間(APTT)和纖維蛋白原試驗(Fg)三項試驗,國際血液學標準化委員會(ICSH)、國際血栓與止血委員會(ICTH)或美國臨床生物化學標準化委員會(NCCLS)有較明確的規定。對于PT試驗規定:(1)用不同級別的凝血活酶國際參考品(如原級凝血活酶參考品67/40,次級參考品68/434等),校正本土制備或生產的組織凝血活酶參考物,本土生產的凝血活酶試劑必須標有國際敏感指數(ISI)值;(2)結果的報告方式棄用“活動度”,采用“秒(s)”和“患者PT與正常PT比率(PRT)”,在口服華法林類藥物監控時,采用“國際標準化比值(INR)”。對于APTT試驗,推薦的方法與儀器要求基本同PT試驗。但應該注意,不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間,對各種因子缺陷、對肝素和狼瘡抗凝物質的敏感性差異很大,應根據不同的檢測目的選擇相應敏感的凝血活酶或活化劑。對于纖維蛋白原試驗,世界衛生組織的生物標準化委員會已將1992年問世的纖維蛋白原標準品89/644定為國際參考品(IRP),并推薦采用改良Jacobsson法和IRP來標準化本地區的次級標準品。在常規纖維蛋白原含量測定時建議使用Clauss法。需要注意的是,目前國內使用的某些儀器可以根據PT的變化換算出纖維蛋白原含量,這種方法只能對纖維蛋白原含量作出大致估計,當含量明顯異常特別是明顯減低時,不能準確判斷。

        根據手術前出血、凝血時間測定結果預測患者是否會術中出血,一直存在爭議。2000年7月,中華醫學會檢驗醫學分會和血液學分會共同起草文件給衛生部臨床檢驗中心,提出“終止使用一般外科手術前的常規出凝血時間檢測,建議用活化的APTT、凝血酶原時間試驗和血小板計數聯合檢測,如臨床有出血史時另加模板式(出血時間測定器)法進行出血時間檢測”。據悉,國家衛生部將批準并下文件建議執行。

       血栓與止血試驗的分析前質量控制

       血液標本的采集、運輸和處理是否得當對試驗結果有直接影響,因此是分析前質量控制的重要環節,但是這些環節經常被忽略或不易標準化,日常工作出現“難以解釋”的試驗誤差常與這些環節有關,必須注意。

        1、標本的采集: 盡可能保證每次采血都在同樣的條件下進行。患者應處于平靜和空腹狀態。采血人員應技術熟練,“一針見血”,以防損傷組織致外源凝血因子進入試管,影響試驗結果。止血帶不應扎得太緊,采血時間應盡量短。采血后立即將血液與抗凝劑充分混勻,但不要用力振蕩,以免溶血。建議使用真空采血系統,可顛倒混勻,確保血液和抗凝劑混合充分。

        2、標本的運輸: 最好在實驗室內采血,或盡快送至檢測地點,嚴防劇烈振動、日光直射和異物落入。有些檢測項目(如β-血小板球蛋白、血小板因子等)需在4℃條件下運送標本,以防止因子Ⅴ和Ⅱ的降解。

        3、標本的處理: 標本應盡快離心。一般在15℃~20℃離心,但纖溶試驗需在4℃左右離心。溶血的血漿會引起血小板活化和凝血時間縮短,應棄之不用。血漿標本原則上應立即檢測,否則應低溫保存。標本的保存時間與保存溫度有關,22℃~24℃保存存2h,2℃~4℃保存4h,-20℃保存2周,-70℃保存6個月。

       開展循證檢驗醫學研究 加強實驗室與臨床信息交流

       循證檢驗醫學研究的目的是:

        (1)采用循證醫學的模式評價檢驗指標的臨床意義,確定其診斷的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值和合適的臨界值。

        (2)加強對臨床診斷和治療的指導作用,開發新的檢驗項目,評價其應用價值。

        (3)適應衛生經濟學要求,篩選可靠指標,剔除不合理或無重要診斷、治療或預后參考價值的檢驗項目,減少浪費,減輕病人負擔。

        (4)收集大規模臨床隨機對照試驗得出的可靠結論,不斷修訂實驗室指標的判斷標準,再用以指導臨床實踐。血栓與出血的形成是多因素、多系統病理生理變化的結果,涉及到血管內皮、血小板、凝血因子、抗凝因子、纖溶系統及血液流變學的變化。

        這些因素是“對立統一”的。所謂“對立”,是指它們的功能是相反的,有的促凝、有的抗凝;所謂“統一”,是指諸因素在神經和體液的調節下,達到平衡,保持健康生理狀態。一旦平衡被打破,或是形成血栓,或是出血不止。血栓的形成可人為地劃分為血管反應期、血小板粘附及血小板栓子形成期、纖維蛋白形成微血栓期、血管修昨及纖溶期,但這是一個動態的、連續的過程,各期是交錯的,調節是對立的,在實驗診斷時往往需要幾個指標組合,進行綜合分析。因此,要通過循征檢驗醫學的研究,確定處于不同病期、不同病理狀態的不同類型疾病的最佳實驗診斷項目組合。既不要憑借某一項參數的變化,單一地、孤立地、靜止地分析問題,更不要不顧病人負擔,“大撒網”式多項目或全項目檢測,造成浪費。為此必須要求技術人員對血栓和止血機制有深入的了解,掌握各項試驗的原理和臨床意義,掌握相關疾病的病理生理基本知識,并不斷地與臨床醫生進行學術交流和信息溝通。

       開展血栓的實驗診斷工作 促進檢驗醫學的發展

       血栓性疾病,尤其是心、腦血管血栓性疾病,已成為我國人口病死原因的第一位,而且發病率有所增加,嚴重危害人類健康。血栓與止血研究的飛速發展,促進了對血栓性疾病發病機制的深入認識,從而推動了血栓性疾病實驗診斷技術的進步。

        近10年來,隨著基礎醫學的深入研究,高科技在醫學領域的應用,各型號的自動凝血儀逐步普及。先進的儀器同機具備生物學、生物化學及免疫學三種檢測系統,既可利用纖維蛋白原轉變成纖維蛋白的瞬間物理特性的變化檢測凝血因子活性,又可利用“酶底物顯色法”檢測參與凝血過程的酶、酶原及酶原抑制物,還可通過免疫方法定量假性血管血友病因子(VWF)、D-二聚體等含量;新型的血小板聚集儀不但可較精確地行全血、血漿的血小板聚集功能檢測,還可觀察血小板鈣、血小板ADP釋放、模擬人體內止血過程的血小板功能儀,準確、客觀地解決了評價血小板粘附功能的問題。

        POCT(point of care test)的發展,使ACT、APTT、PT、D-二聚體的測定可以在床邊進行,方便了臨床和病人。到20世紀末,隨著基因克隆技術日趨成熟,所有在凝血過程中起作用的凝血因子cDNA和基因都已被克隆出來,將為研究凝血因子蛋白質的結構、功能、生物合成開辟新的途徑。基因芯片的應用為某些遺傳性出血性疾病(如血友病)提供了快速的診斷手段。

        血栓與止血的研究涉及生物學、免疫學、生化學、病理生理學、藥理學、分子生物學及臨床醫學多學科。因此,檢驗科應積極開展血栓與止血實驗診斷工作,不斷深入進行基礎研究和臨床實踐,及時捕捉國內外醫學發展前沿信息,不斷引進新方法、新技術、拓寬專業領域,對于提高檢驗醫學工作者的技術素質和學術水平,促進檢驗醫學的學科建設與發展,將起到重要的推動作用。


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