我們知道以往的固定組織或固定細胞成像揭示了非常多的自然秘密,給了我們很大的啟示,但現在的科學研究則希望在最真實的條件下觀察細胞。縱觀顯微鏡的發展歷史,直到15年前,科學家主要還是處理死細胞。現在,活細胞研究的重要性已經越來越被意識到。
加拿大McGill大學成像實驗室主任Claire
M.
Brown表示:“要達到這個研究目的,我們非常需要一個不損壞細胞的封閉環境、且具有比較理想的成像條件。這一條件尤其對于進行動態、三維成像的多標記樣品來說尤其重要。”讓人高興的是,近年來在光學設計、高靈敏檢測器、優選探針和先進軟件方面的改善,使得這一切成為可能。今天的活細胞工作站,不僅僅限于觀察,目前的趨勢已經從結構或細胞器的分析,轉向了功能的相互影響觀察研究。
現在,科學家可以便利的購買到活組織應用的整合新設備,而不用將系統簡單的拼湊在一起。如GE公司的活細胞工作站DeltaVision
Elite提供適用于活細胞成像的高分辨率、高靈敏度、全自動化設備。通過對活細胞進行實時、長時間的成像,觀察細胞內的動態變化過程,如細胞的有絲分裂、鈣火花傳導、細胞運動和遷移等。同時,搭載全內發射熒光模塊(TIRF)對分子和膜運輸之間的囊泡轉運、相互作用成像尤其有用;搭載單分子成像技術,如PALM,STORM等,可實現超高分辨率成像,分辨率可達20nm。在照明波動中,DeltaVision
Elite通過TruLight均一照明光學系統,控制光照的強度和均一性。計算機對這些變量的完全控制,確保了精確的、可重復的成像效果。
DeltaVision
Elite通過ZL的InsightSSI光源,大幅度的降低光毒性和光損傷,實現對活細胞長達500小時的連續成像;同時,ZL的還原型迭代去卷積技術保證高分辨率、高靈敏度的圖像獲取。這一系列的ZL設計在保證高質量圖像的同時,實現了對活細胞的長時間連續成像,“魚”與“熊掌”兼而得之。
另外,ZL的UltimateFocus自動對焦系統通過遠紅外激光實時監測蓋玻片和物鏡鏡頭之間的距離,保持成像焦平面的穩定,防止長時間time-lapse成像過程中跑焦現象的發生。活細胞培養環境控制系統能夠實時控制細胞培養的溫度、濕度和CO2濃度,以及整個成像系統的溫度穩定性,保證成像的精確和可重復性。功能強大的SoftWoRx圖像處理軟件能夠實現XYZ-λ(波長)-T(時間)-P(位置)六維活細胞成像、Time-Lapse成像、去卷積、三維重建、視頻電影制作、多點觀察、細胞跟蹤、共定位分析、FRET/FRAP/TIRF成像、熒光強度定量分析等。
目前,活細胞成像方面的進展仍然在不斷涌現。快速的、不斷改善的動態分析方法,將對活細胞內部的功能蛋白質進行更好的研究。成像專家也在進一步推動原位成像的真實性。人們不僅想去觀察一個動物體中的一個細胞,并且用顯微鏡進行成像,而且也期望看到全貌。你將會看到越來越多的整體動物的成像。對活細胞成像來說,能同時進行多通道成像,并且區別多重熒光信號將變得越來越重要。