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  • 發布時間:2019-03-28 11:55 原文鏈接: 測序反應實驗

    要得到合適的信號強度,可根據 DNA 片段的大小調節 DNA 的用量。適用于 ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 和 GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems) 熱循環儀。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。

    劑、試劑盒

    循環測序試劑盒引物和模板

    儀器、耗材

    薄壁 PCR 管熱循環儀GeneAmpPCRSystem9700 儀

    實驗步驟

    一、材料

    1. 緩沖液和溶液

    ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 或其他循環測序試劑盒

    2. 核酸和寡核苷酸

    引物和模板

    3. 特殊設備

    DNA 擴增用薄壁 PCR 管

    熱循環儀,GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems) 儀或相當產品

    二、方法

    1. 將適量(如上所述)的引物和模板加入到 PCR 管中。

    2. 每管加入 4ul Terminator Ready Reaction mix。

    這是說明書中推薦用董的一半,這一用董已經足夠,而且節省試劑。

    3. 用去離子水補至 20ul, 混勻,稍離心。

    4. 在 GeneAmp PCR System 9700(Applied Biosystems) 或相當產品的儀器上,執行下列程序。


    5. 上步反應結束后,反應產物可立即純化或-20°C 保存以備將來純化。



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