要得到合適的信號強度,可根據 DNA 片段的大小調節 DNA 的用量。適用于 ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 和 GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems) 熱循環儀。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。
劑、試劑盒 | 循環測序試劑盒引物和模板 |
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儀器、耗材 | 薄壁 PCR 管熱循環儀GeneAmpPCRSystem9700 儀 |
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實驗步驟 | 一、材料
1. 緩沖液和溶液
ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 或其他循環測序試劑盒
2. 核酸和寡核苷酸
引物和模板
3. 特殊設備
DNA 擴增用薄壁 PCR 管
熱循環儀,GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems) 儀或相當產品
二、方法
1. 將適量(如上所述)的引物和模板加入到 PCR 管中。
2. 每管加入 4ul Terminator Ready Reaction mix。
這是說明書中推薦用董的一半,這一用董已經足夠,而且節省試劑。
3. 用去離子水補至 20ul, 混勻,稍離心。
4. 在 GeneAmp PCR System 9700(Applied Biosystems) 或相當產品的儀器上,執行下列程序。
 5. 上步反應結束后,反應產物可立即純化或-20°C 保存以備將來純化。
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