消除微生物污染

DBSS

高濃度抗生素培養液

用于傳代培養的材料帶有40×或60×物鏡的相差顯微鏡用于支原體染色的材料

1. 仔細收集污染培養液，如有可能，應測試該有機體對一系列抗生素的敏感性，如果做不到，則應對培養液進行高壓滅菌或加入次氯酸鹽。

2. 用 DBSS 沖洗細胞（每一次沖洗可使污染物濃度減少兩個對數級，除非污染物黏貼在細胞上）。

(a)對于單層培養物，用 DBSS 沖洗培養物三次，然后用胰蛋白酶處理，再用 DBSS 通過離心與再懸浮清洗細胞兩次以上。

(b)對于懸浮培養物，通過離心和重懸，用 DBSS 沖洗培養物 5 次。

3. 將細胞以盡可能低而又合適的細胞濃度接種于新的培養瓶內。

4. 加入含高濃度抗生素的培養基，每兩天換一次。

5. 用高濃度抗生素培養基進行傳代培養。

6. 重復進行 1~4 的步驟，傳代培養三次。

7. 移去抗生素，在無抗生素情況下，將這些細胞再進行三次傳代培養。

8. 用相差顯微鏡及 Hoechst 染色檢査培養物。

9. 對這些細胞再進行兩個月的培養，不加抗生素，檢査以確定所有污染已被消除。

一般的原則是應將污染的培養物丟棄，而不要試圖去除污染，除非是至關重要必須保留的細胞系才考慮去除污染。在任何情況下，很難做到完全消除污染。特別是在酵母污染時，如果試圖去除污染，可能導致產生更頑固的對抗抗生素的細胞。