在液相色譜分析中，我們經常會遇到兩個化合物無法得到基線分離或分離度差。液相色譜中流動相條件，色譜柱選擇以及系統硬件的設置都會影響分離度。我們可以從以下幾個方面考慮： 1.流動相 a. 流動相中有機溶劑的類型和比例，會影響色譜分離的選擇性。對于反相色譜模式，常用的有機溶劑有甲醇、乙腈和四氫呋喃。我們可以通過改變流動相中的有機相種類或調整其比例，來改變選擇性和分離度。 b.流動相的pH值和緩沖鹽的添加也會影響分離度。對于中性的化合物，無論是極性還是非極性的，流動相pH值的改變不會對其選擇性有太大的影響；對于可解離的化合物，pH的改變會產生較大的影響。對于酸性化合物，比如苯甲酸，其pKa為4.2，當流動相pH值大于5.7（pKa+1.5），則苯甲酸以離子型態存在，則與反相固定相之間的作用較弱，保留時間較短，當流動相pH值小于2.7 （pKa?1.5），則苯甲酸以分子形態存在，則與反相固定相之間有更強的保留作用，保留時間更長