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  • 發布時間:2020-07-13 10:31 原文鏈接: 混合劑技術純化人外周血單核細胞

    混合劑技術純化人外周血單核細胞                         

    試劑和器材:

    1. 抗凝血劑:100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L檸檬酸鈉;
    2. Hepes緩沖生理鹽水(HBS):8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;
    3. OptiPrepTM;
    4. 臺式低速離心機;
    5. 巴斯德吸管(短型和長型);

    實驗方法:

    1. 用乙二胺四乙酸(2mmol/L終濃度)或檸檬酸鈉(38g/L終濃度)作為抗凝劑來收集靜脈血;
    2. 在合適的帶帽離心管(可容納5—10ml樣品的15ml管)中,全血與OptiPrepTM(分別為10倍體積和1.25倍體積)輕柔但徹底地混合(反復顛倒幾下);
    3. 在頂端加入約0.5ml Hepes緩沖生理鹽水,并且在20℃,1500g下離心30min;
    4. 用緩慢減速程序或不制動的方法使轉子減速;
    5. 從凹液面向下吸取外周血單核細胞直至距細胞沉淀約1cm處;
    6. 用2倍體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋收集到的外周血單核細胞,再在250g—500g離心5—10min以沉淀細胞;


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