游離甲狀腺素( free thyroxine， FT4) 目前多采用化學發光 法檢測，易受到生物素、甲狀腺激素自身抗體( thyroid hormone autoantibodies， THAAb) 、異嗜性抗體等的干擾，引起 假陽性結果［1-2］。我們發現采用直接化學發光法多次檢測 1 例患者的甲狀腺功能， FT4 均異常增高，排除生物素和異嗜 性抗體的干擾后，通過聚乙二醇( polyethylene glycol，PEG) 對 標本沉淀處理， FT4 水平下降，更符合患者的促甲狀腺素 ( thyroid stimulating hormone， TSH) 變化和臨床表現。現報道 如下。
1 病歷摘要
患者女， 19 歲， 2019 年 1 月 17 日因“發現頸部包塊伴甲 狀腺功能異常 5 余年”入院。患者 5 年前發現頸部包塊，診 斷為甲狀腺功能亢進，予以甲巰咪唑治療。2017 年 10 月 10 日，因甲狀腺腫伴甲狀腺結節在超聲引導下行雙側甲狀腺結 節射頻消融手術，術后繼續給予甲巰咪唑治療。 此次入院甲狀腺功能及抗體結果: 三碘甲腺原氨酸 ( T3) : 2．56 nmol/L，甲狀腺素( T4) : 52．80 nmol/L，游離 T3 ( FT3) :6．59 pmol/L， FT4:73．96 pmol/L， TSH: 1．245 mIU/mL。 甲狀腺球蛋白: ＞500 ng/mL( 參考值:3．50～77．00 ng/mL) ，甲 狀腺球蛋白抗體: 1 049．00 IU/mL( 參考值: 0．00 ～ 115．00 IU/mL) ﹑甲狀腺過氧化物酶抗體: 544．10 IU/mL( 參考值: 0．00～34．00 IU/mL) 。甲狀腺 CT 示: 甲狀腺彌漫性腫大，其 內多發結節，性質不明確，氣管受壓變窄。2019 年 1 月 28 日 在全麻下行雙側甲狀腺近全切除術+雙側喉返神經探查術。 術后病理示:良性結節。
2 實驗室檢查
患者多次于我科檢測甲狀腺功能，檢測結果見表 1。觀 察發現該患者血漿 FT4 均明顯升高，其升高與 T4、 TSH 的變 化不相符，與臨床表現也不相符，遂開展實驗研究。
2．1 儀器與試劑 ADVIA Centaur XP 全自動化學發光免疫 測定儀及配套游離甲狀腺素直接化學發光競爭性免疫分析 法測定試劑盒( 德國 Siemens 公司) 。Cobas e 601 全自動電 化學分析儀及配套 FT4 電化學發光法試劑盒( 美國 Ｒoche 公 司) 。PEG-6000( 天津市致遠化學試劑公司) ， HBＲ-PLUS、 HBＲ-11( Scantibodies Laboratory 公司) 。
2．2 方法與結果
2．2．1 不同方法學檢測結果比較 取 1 月 26 日患者空腹抽 取的靜脈血5 mL 于肝素抗凝管， 3 500 r/min 離心5 min 分離血漿后，在ADVIA Centaur XP 全自動化學發光免疫測定儀上 進行檢測，試劑為配套的游離甲狀腺素試劑盒，檢測方法為 直接化學發光法。剩余血漿分裝成 2 份凍存。1 份送 Cobas e 601 全自動電化學分析儀上進行檢測，使用配套 FT4 試劑 盒，檢測方法為電化學發光法。均按照儀器和試劑說明書進 行檢測。直接化學法和電化學發光法檢測 T3、 T4、 FT3 和 TSH 濃度的結果非常相近，而 FT4 的結果相差很大，分別為 60．28 pmol/L、 6．83 pmol/L。見表 2。
2．2．2 抗異嗜性抗體和 PEG 處理血漿后 FT4 檢測 取凍存 的另一份患者血漿復溶，分別加入 2 種抗異嗜性抗體( HBＲPLUS 阻斷劑和 HBＲ-11 阻斷劑) 以阻斷異嗜性抗體， 20% PEG-6000 沉淀劑處理患者血漿( 可去除 THAAb) ，混勻， 4 ℃ 過夜，離心取上清液再次用直接化學發光法檢測 FT4，具體 處理方法及檢測結果見表3。單獨加抗異嗜性抗體與對照組之間無顯著差異，排除異嗜性抗體的干擾作用。PEG 組與對 照組相比，FT4 明顯降低，由 78． 44 pmol/L 降至 18． 32 pmol/L。
3 討論
該患者多次于我科檢測甲狀腺功能， FT4 均明顯增高， 不隨其他激素( T3、 TF3、 T4、 TSH) 的變化而變化，與臨床表現 不符，考慮為異常增高。FT4 屬于極微量激素，對檢測方法 的靈敏度要求高，過去常采用放射免疫法，目前多為化學發 光法。本實驗室使用的西門子 ADVIA CentaurXP 檢測原理 為直接化學發光競爭性免疫分析，簡單、快速、靈敏度高，但 由于采用一步法，檢測試劑直接與血漿接觸反應，很容易受 到血漿中其他物質的干擾［3］。發現患者 FT4 多次異常增高 后，我們首先考慮是否為檢測方法導致 FT4 異常增高，因此 更換檢測方法，改用電化學發光法在 Cobas e 601 上進行檢 測，結果 FT4 水平明顯降低，與臨床表現更加相符。直接化 學發光法和電化學發光法之間的主要差異為標記抗體不同， 與固相載體結合能力具有一定差異，導致內源性的結合蛋白 的親和力不同，這可能會導致 FT4 檢測結果差異。文獻報道 血漿中存在的生物素、 THAAb、異嗜性抗體等均可能會對 FT4 的檢測造成干擾，引起假陽性結果。當待測樣本中存在 高濃度游離生物素時，可與鏈霉親合素結合，阻止部分抗原 抗體復合物中生物素化抗原與鏈霉親合素結合，造成游離信 號增強，導致 FT3、 FT4 結果假性增高［2］。經詳細詢問病史， 該患者并未服用含生物素的藥物或保健品。另外， 2 種儀器 均使用含生物素的試劑，不會只影響ADVIA Centaur XP 而不 影響 Cobas e 601，也不會只影響 FT4 的檢測而不影響 FT3、 TSH 的檢測，因此排除生物素的影響。異嗜性抗體是一類免 疫球蛋白，臨床使用的免疫試劑抗體多來源于實驗動物，而 異嗜性抗體可與多種動物 Ig 的 Fc 和 Fab 表位非特異性結合 從而干擾測定結果，已有文獻報道 HA 可影響 FT3、 FT4、 TSH 等的檢測［4］。為判斷該患者血漿是否存在異嗜性抗體的干 擾，我們分別用 2 種抗異嗜性抗體( HBＲ-PLUS 阻斷劑和 HBＲ-11 阻斷劑) 處理血漿后再次在 ADVIA Centaur XP 上進 行檢測，抗異嗜性抗體組與對照組之間沒有明顯變化，排除 異嗜性抗體的影響。有文獻報道，影響 FT4 異常增高的內源 性結合蛋白主要考慮為甲狀腺素自身抗體的干擾［5］。當 THAAb 存在時，示蹤劑標記的 T4 與樣品中的 THAAb 異常 結合，示蹤劑標記的 T4 與檢測的標記抗體結合減少，由于采 用競爭法，所以檢測出樣本 FT4 增多，結果假性增高。 THAAb 雖然在普通人群中并不常見，但在甲狀腺疾病和非 甲狀腺相關的自身免疫病患者體內其濃度會明顯增高，尤其 在橋本甲狀腺炎患者體內可高達 40%［6］。目前并無可特異性阻斷 THAAb 的相關試劑，無法直接通過抗體去除 THAAb 的影響。THAAb 多屬于 IgG 亞型， PEG 是一種常用的分離 劑，已有文獻報道 PEG 的沉淀作用可以除去血漿中的 THAAb ［7］ 。我們用 20%的 PEG 沉淀血漿后再次在 ADVIA Centaur XP 上檢測， FT4 水平明顯下降，與其他激素水平和臨 床表現更加相符。這證實患者血漿中存在干擾物質會對直 接化學發光法檢測造成干擾，可以通過 PEG 沉淀處理除去 這種干擾。臨床醫生與檢驗工作者如果不了解 FT4 檢測的 干擾因素，不能正確對標本進行前處理，將會得到假陽性結 果，導致誤判、誤診，耽誤病情，甚至不適當的治療。因此，臨 床工作中如遇結果異常增高且與臨床癥狀不符的，應該考慮 是否存在干擾因素。 在臨床檢測中，血漿成分復雜，個體差異大，當出現異常 結果時，我們并不能快速明確哪些物質可能會對檢測造成影 響，也可能無法特異性地去除某種物質的干擾。排除其他常 見原因后，可以通過 PEG 對血漿進行沉淀處理后再次檢測， 避免誤診。PEG 為一種非特異性沉淀劑，經濟實惠，可簡單、 快速沉淀多種大分子物質，如去除 THAAb、脂質等對檢測的 干擾，應在臨床普遍推廣［7］。
參考文獻略。