激光共聚焦的前期步驟

1、做細胞爬片（爬片的步驟就不詳述了），注意：洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鮮配制的（一周以內的都能用）， 因為PBS和4%多聚甲醛放久了后，都會有自發熒光。

2、抗體的孵育：預實驗的時候熒光根據文獻和經驗設定一、二抗的濃度，一抗4度孵育過夜（時間8～12h）；二抗（熒光抗體）孵育時要避光，孵育好后用PBS充分沖洗；可以將做好的片子直接在板子中孵育，如果從節約的角度來看，可以用12或24孔板比較好。

3、做好以上步驟后，將板子里放點PBS，保存片子濕潤，不要干片，這樣會影響細胞形態。

4、到激光共聚焦觀察室后，再將爬片取出，在干凈的載玻片上滴一滴50%的甘油，然后將爬片取出來倒扣在滴過甘油的載玻片上（即細胞在2層玻片之間，一定不要反了哦；還有千萬不要用中性樹膠封片！

5、顯微鏡下觀察即可。