激光掃描共聚焦顯微鏡在組織化學免疫組織化學中的應用

激光掃描共聚焦顯微鏡（laser scanning confcal microscope,LSCM）是激光、電子攝像和計算機圖像處理等現代高科技手段相互滲透的產物。由于其高分辨率，高靈敏度及高放大率等特點，在細胞水平上能作多種功能測量和分析，如熒光定量測量、共聚焦圖像分析、三維圖像重建、活細胞動力學參數監測和細胞間通訊研究等，成為生物醫學重要的研究工具。一臺配置完備的激光掃描共聚焦顯微鏡已經在功能上完全取代了以往任何一種光學顯微鏡，它相當于幾種制作精良的常用顯微鏡有機組合，如倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、暗視野顯微鏡及相差顯微鏡等，可謂是普通光學顯微鏡質的飛躍。激光掃描共聚焦顯微鏡除能對組織細胞進行三維圖像分析和各種熒光標記物的微量分析外，還能進行細胞內Ca²⁺和pH值等動態分析測量、細胞受體移動檢測、膜電位變化檢測、酶活性和物質轉運測定等。因此，它可以對組織細胞的多種功能進行自動地微量定位和定量。

    激光掃描共聚焦顯微鏡在組織化學和免疫組織化學中的主要應用是通過一種或多種熒光探針標記后，對固定或活體組織細胞標本進行觀察研究，免疫熒光組織化學是應用zui多的技術。激光掃描共聚焦顯微鏡具有紫外光和激光雙重激發光源系統，免疫熒光組織化學染色后抗體己被標記熒光素，不同的熒光素被不同波長的光激發，熒光強度的變化可被激光掃描共聚焦顯微鏡中的計算機分析軟件采集分析，從而準確反映各指標量的變化。當這些標本用普通熒光顯微鏡觀察時，來自焦點以外其他區域的熒光對結構分辨率干擾較大，尤其是標本厚度在2um以上時，其影響更為顯著。共聚焦方式可以排除焦點之外熒光干擾使分辨率提高。激光掃描共聚焦顯微鏡的功能可分為圖像分析功能和細胞生物學功能兩大類，運用于組織化學和免疫組織化學方面的主要是圖像分析功能。凡是可以標記特異性熒光探針的組織細胞標本均可以利用激光掃描共聚焦顯微鏡進行圖像分析。它的圖像分析處理功能主要體現在三方面，即光學切片、三維圖像重建和熒光定位以及定量分析。