特殊細胞培養實驗_球體細胞培養實驗

細胞

Hanks培養液胰蛋白酶

吸管

1.  瓊脂鋪底的培養瓶

30 ml無菌培養瓶，每瓶中加5 ml 2 %瓊脂培養基，冷卻，形成平坦底層后備用；

2.  取生長狀態良好已聯接成片的細胞，用彎頭吸管伸入瓶內，把細胞層縱橫割劃成若干小區后，倒出培養液；

3.  加入0.25 %的胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下邊消化邊觀察，當細胞小區邊緣微卷起后便立即終止消化，倒出消化液，用Hanks輕輕漂洗一次（不洗亦可），加入新培養液3~5 ml，用吸管把已松動的細胞片吸打下來；分裝入1~3 個含2 %瓊脂培養基底層的培養瓶中，置溫箱繼續培養，數日后便可生長成細胞球體；

4.  換液

培養1~2 日后，如需換液，微傾斜培養瓶，令培養液集于培養瓶底角，停片刻，待球體細胞下沉后，吸除部分培養液，再補充新培養液。

1.  消化細胞方法是影響細胞能否集聚成團，形成球的一個重要因素，如用0.25 %的胰蛋白酶加0.2 %的EDTA消化細胞，雖能把細胞消化成分散的細胞懸液，但接種在任何底物上都不易形成球體，可能與EDTA 作用有關。

2.  當細胞尚未連接成片時，消化后也容易形成分散的細胞懸液，同樣難以形成球體；從而細胞片是形成球體生長的一個重要條件。

球體細胞也可和單層細胞混合培養，便于研究兩種不同細胞的相互影響。方法是

1.  先做單層培養，待細胞長成單層細胞后，把2 %瓊脂培養液注入瓶內，令其在單層細胞上面形成瓊脂層。注意在加瓊脂時，要使瓊脂冷卻到快要凝固前再注入瓶內，以避免過熱損傷細胞。

2.  當瓊脂脂固后，再把已準備好的另一種細胞球體培養液接種在上面，便形成瓊脂層下為單層細胞，上層為球體細胞的混合培養。下層細胞生活在瓊脂培養液中，既能從瓊脂培養液中也能從上層培養液中獲取營養；因瓊脂的限制卻不易與上層球體細胞相混或干擾，但相互卻能發生影響，可借以研究細胞相互關系。