如上文提到PD-1抗體治療中擁有這么關鍵的作用，那么PD-1信號通路與CD226之間會存在怎樣的聯系呢？與已確定的PD-1–SHP2 脫磷酸化靶點CD28（共刺激受體）比較，在淋巴細胞功能相關抗原-1（LFA-1）存在情況下，CD226可通過PD-1–SHP2進行劑量依賴性脫磷酸化（圖5C）。PD-1抗體處理組結果顯示，CD8+腫瘤浸潤淋巴細胞（TILs）中CD266出現高度的磷酸化現象，而對照組CD266無磷酸化出現，說明瘤內PD-1/PD-L1通路在CD8+T細胞對CD266起負調控作用。以上數據揭示CD266是PD-1–SHP2脫磷酸作用的另一位關鍵靶點。（如圖5D-E）
圖5. 在小鼠MC38腫瘤模型上進行抗PD-1與抗GITR抗體聯合治療中，CD226介導抗腫瘤反應的研究
為了進一步驗證CD266是抗PD-1與抗GITR抗體聯合療法中介導抗腫瘤的關鍵因素，研究者在CD266抑制劑處理過的荷瘤小鼠以及CD266基因敲出的荷瘤小鼠身上應用抗PD-1抗體與抗GITR抗體聯合療法，結果此療法并未發揮抗腫瘤活性，也沒有改善小鼠的生存期（圖5G），而通過阻斷TNFR超家族信號途徑和CD28分子均未影響兩種抗體聯合療法的抗腫瘤作用。這為CD266在PD-1抗體與GITR抗體聯合療法中介導抗腫瘤作用提供了有力證據。
當然一切好的科研成果一定是基于大量的實驗研究的，這不，科學家們隨后用RECNA（小鼠腎癌）模型進一步驗證CD266分子在抗PD-1與抗GITR抗體聯合治療中的關鍵性作用，實驗數據顯示與前文MC38小鼠模型上研究得到的結論高度吻合（圖6）。
圖6.在小鼠RECNA腎癌模型上進行PD-1/GITR抗體聯合治療中，CD226介導抗腫瘤反應的研究
好了，以上就是對本文做的簡要回顧。
總結起來，雖然PD-1抗體與GITR抗體各成一派，但兩者卻又強強聯合，其聯合治療過程中不僅提高CD266活化表達，并且有效的促進效應記憶細胞的增殖，維持抗腫瘤的長效性，進而發揮抗腫瘤作用。
而這些耀眼的數據，令人驚嘆的結果都是基于科學的研究方法和有力的小鼠模型。
百奧賽圖已經自主開發出B-hPD-1/B-hGITR雙免疫檢查點人源化小鼠，并在此前的研究工作中分別對單免疫檢查點B-hPD-1和B-hGITR人源化小鼠進行了大量體內相關藥效驗證（如圖7，8）。B-hPD-1/B-hGITR更適合對人的PD-1抗體與GITR抗體藥物進行體內藥效評價（目前正在進行藥效驗證），并且文章中提到的藥效動力學中的TILs研究也是本公司特色的體外檢測服務平臺之一。如有需要，歡迎小伙伴們前來咨詢及合作！
圖7. PD-1(Keytruda)抗體與化療藥物聯用體內藥效
將小鼠結腸癌MC38細胞（人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1）移植到B-hPD-1純合小鼠體內建立皮下腫瘤模型，待腫瘤體積約150±50mm3時將動物分組(n=8)。
結果顯示：抗人PD-1抗體Keytruda和化療藥物Cisplatin聯合用藥組與單獨用藥組相比表現出更為明顯的腫瘤抑制效果，證明B-hPD-1小鼠是評估人PD-1抗體與化藥聯合用藥體內藥效的有力工具。 A. 腫瘤平均體積±SEM，B. 小鼠平均體重±SEM。
圖8.利用B-hGITR小鼠進行抗人GITR抗體藥效驗證實驗
將小鼠結腸癌細胞MC38移植到B-hGITR雜合小鼠皮下，待腫瘤體積約150±50mm3時將動物入組至對照組和治療組(n=6) 。
結果顯示：相同劑量下，不同抗人GITR抗體對腫瘤生長有不同程度的抑制作用。 A. 腫瘤平均體積±SEM，B. 小鼠平均體重±SEM。結果證明：B-hGITR小鼠是評估人GITR抗體體內藥效的有力工具。
參考文獻
Wang B, Zhang W,Jankovic V，et al. Combination cancer immunotherapy targeting PD-1 and GITR can rescue CD8+ Tcell dysfunction and maintain memory phenotype. Sci Immunol. 2018 Nov 2;3(29). pii: eaat7061.
