豬肺泡巨噬細胞的培養操作規程！
一、細胞簡介
平臺編號：bio-105900
規格：1ml/T75
拉丁屬名：3D4/21
產品名稱：3D4/21（豬肺泡巨噬細胞）
型號：HTX2097
生長特性：貼壁
組織來源：豬肺泡巨噬細胞
培養基：89%DMEM+10%FBS+1%雙抗
培養溫度：37℃
種屬：其它細胞系/倉鼠、猴、豬、狗、雞、鴨等
到貨周期：10-15個工作日
二、3D4/21（豬肺泡巨噬細胞）介紹
母細胞3D4來源于pSV3neo質粒轉染豬原代肺泡巨噬細胞得到的。該克隆通過G418篩選得到。
三、3D4/21（豬肺泡巨噬細胞）特性
1）來源：豬肺
2）形態：巨噬細胞樣，貼壁生長
3）含量：>1x10e6 個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
四、3D4/21（豬肺泡巨噬細胞）接受后的處理
1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的完全培養基。
4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。
5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
五、細胞用途：僅供科研使用。
本公司的細胞培養操作規程，供參考
一、培養基及培養凍存條件準備
1）準備RPMI-1640培養基（RPMI-1640，GIBCO，貨號11875085），90%；添加0.1mM NEAA, 1mM丙酮酸鈉；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。
3、輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。
4、移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，最后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X10e6個細胞凍存。
三、注意事項
1、收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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