1、瓊脂鋪底的培養瓶：30ml無菌培養瓶，每瓶中加5 ml 2%瓊脂培養基，冷卻，形成平坦底層后備用。
2、取生長狀態良好已連接成片的細胞，用彎頭吸管伸入瓶內，把細胞縱橫割劃成若干小區后，倒出培養液。
3、加入0.25%的胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下邊消化邊觀察，當細胞小區邊緣微卷起后便立即終止消化，倒出消化液，用Hanks輕輕漂洗一次，加入新培養液3~5
ml，用吸管把已松動的細胞片吸打下來，分裝入1~3個含2%瓊脂培養基底層的培養瓶中，置溫箱繼續培養，數日后便可生長成細胞球體。
4、換液：培養1~2日后，如需換液，微傾斜培養瓶，令培養液集于培養瓶底角，停片刻，待球體細胞下沉后，吸除部分培養液，再補充新培養液。