以鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]和琥珀酸鈉為底物，使琥珀酸脫氫酶催化反應將鐵氰化鉀還原為亞鐵氰化鉀[K4Fe（CN）6]，K4Fe（CN）6再與Fe3+作用生成普魯士藍，在700nm波長測定吸光值，以檢測普魯士藍之生成量，作為琥珀酸脫氫酶的還原力，吸光值愈高表示琥珀酸脫氫酶活力愈強。
