瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖為介質,對不同大小的DNA 或 RNA 實現分離的一種電泳方法。瓊脂糖是一種多糖,具有親水性,但是不帶電荷。
使得 DNA 在堿性條件下使其帶負電荷(pH8.0 的緩沖液),在電流作用下,以瓊脂糖凝膠為介質,由負極向正極移動,根據不同的 DNA 分子片段的大小和形狀不同,在電場中泳動的速率也不相同,同時在樣品中加入染料能夠和DNA 分子間形成絡合物,經過紫外照射,可以看到 DNA 的位置,從而達到分離、鑒定的目的。
瓊脂糖凝膠電泳注意事項
底板一定要用膠帶封緊,否則灌膠時凝膠會漏出。可以在灌膠時先倒少量凝膠在交界處,利用凝固的凝膠將其封緊。
梳子一定不能插到底部,應距離底部1-2mm,否則拔梳子時容易弄破凝膠,導致漏膠,加熱時應注意不要讓瓊脂糖沸騰得太厲害,稍稍沸騰至溶液清涼,即其全部溶解即可,過度沸騰會導致凝膠實際濃度的提高。
將凝膠放入電泳槽時要注意極性,不要正負極顛倒。要注意撕去兩端的封帶,凝膠的濃度與待分離的DNA的大小有關。一般濃度為1%,低濃度的膠特別易碎,要注意。