何謂生化檢測的基質效應？怎樣評估基質效應？該如何避免基質效應的發生？
臨床生物化學分析中基質效應，已日益受到重視。最早是在酶活力測定中用人工制備的參考物質時發現。在酶法分析與免疫化學分析中，普遍存在的基質效應影響了定量測定的準確性。 按美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）文件的定義，“基質效應”（matrixeffect）是指：①標本中除分析物以外的其它成分對分析物測定值的影響；②基質對分析方法準確測定分析物的能力的干擾。廣義來說，基質效應也應包括已知的干擾物（膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸等干擾物），但目前只將基質效應限于生物材料中未知或未定性的物質或因素（如粘度、pH等）的影響。基質效應所致分析結果的偏差稱為基質偏差（matrix bias）。用作校準物質或質控物，經過處理的混合血清，由于血清機制的理化性質在處理過程中的改變，在常規測定上往往出現基質偏差。基質偏差的出現也與分析系統（包括方法、試劑及所用儀器設備）有關，所以有人將基質效應定性為方法、材料與基質的特異性反應。 在基質效應的評估方法方面，通常認為測定新鮮（或冰凍）血清無基質效應，決定性方法或參考方法也無基質效應。參考訪法與常規方法測定同一批新鮮血清的結果一致，表示這項常規方法沒有方法誤差，如有差異則代表常規方法的“校準偏差”（calibration bias）。用參考方法與常規方法測制備物（如室間質評樣品）時往往得不一致結果，這種差異稱作調查偏差（survey bias）。調查偏差與校準偏差之差即基質偏差。 減少基質效應的主要措施包括：
1、改進室間質評樣品，使其作用更像新鮮人血清；
2、改進儀器設計及試劑組成；
3、選擇方法及方法學參數，使其適應性更強，且容易掌握，對制備物（校準物、室間質評樣品與質控物）基質的確切性質不敏感。 王達 二、目前國際上公認的測定葡萄糖參考方法是什么？與其它常用檢測方法比較，有何優越性？ 目前國際上公認的測定葡萄糖參考方法是己糖激酶-UV法（HK-UV法），其測定原理是： 標本中的葡萄糖在ATP的存在下，由己糖激酶的作用生成6-磷酸葡萄糖（G-6-P），G-6-P又在6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6-PDH）的作用下，并且在氧化型（NADP）的存在下，轉變成6-磷酸葡萄糖酸，此時在波長330~350nm（或采用主波長330~350nm，副波長405~800nm的雙波長測定法）下測定生成的還原型（NADPH）的增加量，求出葡萄糖濃度。 [參考值] 血清：3.3~5.6 mmol/L（60~100 mg/dL） 與常用的葡萄糖氧化酶法（GOD法）比較，其優越性主要表現在： 葡萄糖氧化酶法（SOD法）特異性催化β-D-葡萄糖。而葡萄糖α和β構型各占36%和64%，要使葡萄糖完全反應，必須使α-葡萄糖變旋為β-構型。國外某些商品試劑中含有變旋酶，可加速變旋過程。也可通過延長孵育時間，自發性變旋完成轉化。結果的準確性必然受到影響。 SOD法中，第二步過氧化物酶反應特異性低，一些還原性物質，如尿酸、維生素C、膽紅素、血紅蛋白、四環素和谷胱甘肽等，可與色原性物質競爭H2O2 ，從而消耗反應過程中所產生的H2O2，產生競爭性抑制，使測定結果偏低。 己糖激酶法是目前國際上公認的測定葡萄糖參考方法，該法通常用終點法測定，反應迅速，適合于各種生化分析儀。 己糖激酶法基本不受溶血、脂血、黃疸、尿酸、維生素C及藥物的干擾，其準確度和精密度相對較高。 三、血清堿性磷酸酶（ALP）測定的常用方法有幾種，它們之間有何差別？ 正常成人血清ALP主要來自肝臟，而來自骨組織的ALP一般少于總活性一 半。其各自含量與年齡密切相關，但也受性別的影響。還可能存在少量的小腸型ALP，特別是血型為分泌型B型或O型的人。 現已知人體含4型ALP同工酶，即腸型（IALP）、胎盤型（PALP）、生殖細胞型（GALP）和非特異組織型（TUALP）ALP。其中非特異組織型堿性磷酸酶在基因表達后經過不同的修飾形成肝、腎、骨等次級同工酶。 [臨床意義] 肝膽疾病，尤其是阻塞性黃疸患者，該酶活性顯著升高。骨骼疾病時血清ALP活性增高。血清ALP活性測定成為鑒別肝膽疾病和診斷骨質增生不可缺少的指標。 [測定原理] 在堿性條件下，堿性磷酸酶將無色磷酸對硝基苯酚水解為黃色對硝基苯酚，在 405nm測定對硝基苯酚生成的速率，這個速率與血清中ALP活性成正比。反應需要Mg2+作為激活劑。 [常用測定方法] 測定ALP活性受到組織來源、底物類型、反應溫度，特別是緩沖液種類的影 響，目前，世界范圍內生化試劑主要生產廠家，生產的ALP檢測試劑盒的主要差異就在于所使用的緩沖液不同。常用的激活型緩沖液不僅起緩沖作用，并可作為磷酸的受體參與反應，因而能增進酶促反應的速率。激活型緩沖液中，二乙醇胺（DEA）的激活作用比2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）的激活作用更強。因此用不同緩沖液測定的ALP活性，其參考值不同。 不少國家，包括我國，多采用AMP或DEA做緩沖液，但這兩類物質不易提純， 前者常混有5-氨基-3-吖-2，2，5-三甲基乙醇，后者易含一乙醇胺，均對ALP有抑制作用。故日本學者建議采用2-乙氨基乙醇緩沖液，而德國學者建議使用甲基葡萄糖胺緩沖液，此類試劑純度高，不含抑制ALP活性的物質，可不加螯合劑，其pK值高于DEA。根據所使用的激活型緩沖液不同，常用的檢測方法主要有四種： IFCC推薦方法：AMP（2-氨基-2-甲基-1-丙醇）緩沖液正常參考范圍：45~130 U/L，37℃ JSCC推薦方法：EAE（2-乙氨基乙醇）緩沖液正常參考范圍：115~359 U/L，37℃ GSCC推薦方法：DEA（二乙醇胺）緩沖液正常參考范圍：80~260 U/L，37℃ DSKG推薦方法（新GSCC方法）：MEG（N-甲基-D-葡萄糖胺）緩沖液正常參考范圍：45~130 U/L，37℃ 注：作為IFCC推薦的方法，IFCC有關專家也在考慮，ALP測定時所使用的緩沖液是否應該更換。目前SYSMEX公司在國內銷售的是采用JSCC推薦方法的檢測試劑盒，而采用IFCC推薦方法的檢測試劑盒正在辦理注冊證，近期也將上市。