生物安全柜選擇和使用

　　生物安全柜是一種設備，它的作用就是有效地降低實驗室獲得性感染的機會，減少人與樣品或樣品與樣品之間交叉污染的機會，用于保護操作人員，保護實驗室環境，保護實驗材料的生物安全。

　　在臨床實驗室，操作感染性標本時或作病原體分離培養、制備菌種時會因為樣品的振蕩、搖動、傾注、攪拌、移液等操作或液體的灑落，產生肉眼看不見的直徑<5／zrn的氣溶膠或產生直徑為5～100腫的液滴，這些微粒中含有活的致病微生物，可以被操作者吸入或污染工作臺面上的其他樣品。生物安全柜是一種設備，它的作用就是有效地降低實驗室獲得性感染的機會，減少人與樣品或樣品與樣品之間交叉污染的機會，用于保護操作人員，保護實驗室環境，保護實驗材料的生物安全。

　　生物安全柜的種類及特點

　　在過去的幾年中，生物安全柜的設計已經過幾次改進。主要的改進包括兩方面:一是在排風系統增加高 效微粒空氣濾器(high．efficiency particulate air HEPA)。HEPA濾器可以捕捉99．97％的直徑在0．3 ban的粒子；對>0．3腫粒子的捕獲達99．9％。這使所有已知的感染因子均可被有效地截留，保證排出的氣體中不含微生物；其二，經HEPA濾過的氣體覆蓋工作臺表面，使臺面上操作器材免受污染。根據對生物遏制程度的不同，目前設計的生物安全柜有3種類型：工、Ⅱ級(A1、A2、B1、B2型)、Ⅲ級。購買時可根據各自工作性質確定需要防護的類型，選擇相應的生物安全柜。

　　工級生物安全柜

　　級生物安全柜(圖1)允許實驗室內空氣從前面開口處以0．38 m／s的zui小速率進入生物安全柜，并經排風管排出安全柜。定向流動的空氣可以將工作臺上形成的氣溶膠迅速帶離，不與操作人員接觸，直接經管道再經HEPA過濾后排出。有3種排放形式：

　　①排入實驗室，再通過實驗室排風系統排到建筑物外面；

　　②直接通過建筑物的排風系統排到建筑物外面；

　　③直接排到建筑物外面。

　　 HEPA濾器可以裝在生物安全柜的壓力排風系統內或裝在建筑物的排風系統內。有的生物安全柜有一體式排風扇，其他的借助建筑物排風系統的排風扇。I級生物安全柜的設計簡單，應用廣 泛。可提供個人和環境的保護作用，也可用于接觸放射性核素或揮發性化學物質的操作。由于進入的氣體是實驗室未凈化的空氣，因此對操作物品不具防污染保護作用。

　　II級生物安全柜

　　Ⅱ級生物安全柜又稱為層流生物安全柜。與工級生物安全柜不同之處是進入的空氣先經HEPA過濾，保證覆蓋臺面上的空氣是無菌的，不僅提供個人防護，也保護樣品不受污染。Ⅱ級生物安全柜共分Ⅱ級A和Ⅱ級B型2種，又可進一步再分為Ⅱ級A 1、Ⅱ級A 2、Ⅱ級B 1、Ⅱ級B2型。Ⅱ級生物安全是自遏型的。流動空氣中的70％可以反復循環再利用。

　　此種生物安全柜適合于細胞或組織培養、接觸2～3級危險等級病原體的操作，如果穿正壓防護服可在Ⅱ級生物安全柜上從事接觸4級危險等級感染因子的操作。

　　(1)Ⅱ級A型生物安全柜

　　Ⅱ級A型生物安全柜有1個內置風機將實驗室空氣以0．38 m／s的速率吸入安全柜，通過HEPA濾器后向下，在距工作臺表面6．18 cm處分開，一半通過前面的排風格柵，另一半通過后面的排風格柵。所有實驗中產生的氣溶膠或液滴均被向下氣流帶走。氣流經排出通道到達安全柜頂部的2個HEPA濾器之間，此時，約70％的氣體經供風HEPA過濾器重新返回柜內操作區域被再利用，其余30％的氣體經排風過濾器后被排到實驗室再反復利用，或通過建筑物的排風系統排到外界。

　　(2)外排風Ⅱ級

　　A2型、B1型、B 2型生物安全柜外排風Ⅱ級A2型、B1型、B 2型生物安全柜都由Ⅱ級A1型生物安全柜變化而來。這些生物安全柜各有特點(見表2)，包括從開口吸人空氣的速度、工作臺面上再循環的空氣量、柜內空氣的排出量、安全柜的排風系統、壓力裝置，不同型別的生物安全柜可用于不同的實驗目的。

　　Ⅱ級生物安全柜A型與B型的差異在于：覆蓋工作臺表面的循環氣體和排出氣體的量不同，排出系統不同，詳細材料可以從制造商的說明書中獲得。

　　Ⅲ級生物安全柜

　　Ⅲ級生物安全柜整個環境是完全密閉的，進入的氣體經HEPA過濾，排出的氣體經2層HEPA過濾。有1個專門的系統保持柜內壓力在124．5Pa，呈負壓狀態，可提供zui好的個人防護作用，用于4級危險程度病原體的操作。實驗時可容2位操作人員將手伸人手套箱內進行操作。柜旁配備1個可以滅 菌的裝有HEPA過濾排風裝置的傳遞箱。柜底下有化學消毒劑浸泡的盒子，安全柜可與雙門的高壓滅菌器連接，接受已滅 菌的物品并將用過的材料移出安全柜作滅菌處理。可以將幾個手套箱連在一起以增大工作面積。Ⅲ級生物安全柜適用于Ⅲ級或Ⅳ級生物安全水平的實驗室。

　　生物安全柜的通風連接

　　Ⅱ級A1型和A2型外排式生物安全柜有“套管式”或“傘形排氣罩式”的連接。套管安裝在安全柜的排風管上，將安全柜內排出的氣體，引入建筑物的排氣系統。在套管與安全柜排風管之間留有1個直徑差為2．5 cm的開口，以便讓實驗室內的空氣一起抽人建筑物的排風系統中。建筑物的排風能力必須能滿足房間和柜中排風的要求。套管必須是可拆卸的或設計成可對生物安全柜進行操作測試類型。通常，建筑物氣流的波動對套管式連接的生物安全柜的功能不會有太大的影響。

　　Ⅱ級B1和B2型生物安全柜通過硬管，亦即沒有任何開口地、牢固地連接到建筑物的排風系統，或者zui好是連接到專門的排風系統。建筑物排風系統的排風量和靜壓必須與生產商所指定的要求正好一致。對硬管道連接的生物安全柜進行認證時，要比將空氣再循環送回房間或采用套管連接的生物安全柜更費時。

　　生物安全柜的選擇

　　購買生物安全柜時應考慮所提供的生物防護作用是針對操作人員個人的還是針對實驗樣品的；若是針對操作人員的防護應明確是針對病原微生物的還是針對有毒化學物質或兩者兼而有之。若是針對病原微生物的還應強調微生物的生物危害級別；若是針對有毒化學物質的可按照以下原則作選擇：工級或Ⅱ級A型生物安全柜中不進行揮發性或毒性化學物質操作。Ⅱ級B1型生物安全柜只可用于少量的揮發性或毒性化學物質的操作，如要進行一定量的揮發性或毒性化學物質的操作必須使用Ⅱ級B2型生物安全柜。不同型別的生物安全柜排氣特點不同。

　　1．安放

　　進入生物安全柜的空氣速率約是0．45 m／s，按照這種速率，氣流的完整性很容易受附近人員的走動、窗戶的開關、門的開啟和關閉、空調運行等因素的影響。為避免上述因素的干擾，生物安全柜應放在遠離人員活動、物品流動以及可能會擾亂氣流的地方。為了方便起見，應在安全柜的后面、左右兩側面各留30 cm的空間，以利于安全柜的維護。上端應留30～35 cnl空間，以便準確測量空氣通過排風過濾器的速度及排風過濾器的更換。

　　2．操作人員

　　使用生物安全柜時，操作人員手臂的伸入或取出時應緩慢，垂直于前端開口處，從而保證安全柜前端氣流的完整性。應在手或胳膊伸入柜中1 min后開始操作，以便安全柜對手或胳膊表面的空氣進行凈化處理。實驗所需器材應一次性放人生物安全柜，盡量減少或限制操作人員手在安全柜中的進出次數。

　　3．實驗材料的放置

　　Ⅱ級生物安全柜前端開口處嚴禁被紙張、設備或其他物品覆蓋。物品放人生物安全柜后，表面要用70％的乙醇擦拭。柜內應備有1塊浸過消毒劑的毛巾，以便蘸吸濺出的液體。實驗材料盡量放在柜的后面，笨重的物品放在一邊，產生氣溶膠的物品也應放在柜的后面。實驗器材應按順序從清潔的排放到污染的。污染的實驗材料不。應隨時拿出柜外，操作者的手也不應頻繁地進出安全柜。

　　4．操作和維持

　　大多數的生物安全柜設計成一 天24 h開機，調查發現連續開機有利于控制實驗室灰塵和粒子。Ⅱ級A型不用時可以關閉。Ⅱ級B型在使用時要保持實驗室空氣平衡，因此一 天中若有數個操作過程，其間不應中斷運行。實驗開始前5 rain就應啟動生物安全柜，凈化局部空氣。使用中若出現任何故障均應及時向上級人員報告并請專職技術人員維修。

　　5．紫外線

　　生物安全柜中不需要紫外燈。假如盯要用，每周應對燈管作清潔，除去塵埃，保證殺菌效果。應定期監測紫外燈的輻射強度。要防止紫外線對眼睛或皮膚的灼傷。

　　6．明火

　　?生物安全柜內近似無菌的環境中應避免使用明火，一方面它可干擾氣流運行，其次，若操作中使用揮發性或易燃物質時會造成危險。操作時需用接種環的，盡可能地用一次性的塑料接種環，使用金屬接種環的應該用微型燃燒器或電爐滅 菌而不應該使用明火。

　　7．溢出

　　?在實驗室工作的每一個人都應熟知含微生物的樣品溢出時的處理程序。一旦生物安全柜中發生有生物危害的物品溢出時，應在安全柜處于工作狀態下立即進行清理。要使用有效的消毒劑，并在處理過程中盡可能減少氣溶膠生成。實驗完畢后，柜中所有接觸病原體的材料均應作消毒滅菌處理。

　　8．清潔和消 毒

　　?工作完畢后，柜中所有的物品都應清 除表面污染并移出柜外，柜內工作臺表面和柜的內壁應用含氯石灰(漂白粉)或70％乙醇消 毒。若用腐蝕性的化學劑消毒后還應用滅 菌水再擦洗。關機前應運行5 min，以便對殘留氣體進行凈化。

　　9．清 除污染

　　濾膜更換之前生物安全柜要由專業人員用甲醛熏蒸消 毒。

　　10．個人防護設施

　　使用生物安全柜的操作人員應穿工作服。在生物安全1～2級實驗室中工作的人員可穿普通的工作服；在3～4級實驗室工作的人穿反背式實驗隔離衣具有更好的保護效果。手套應能包住腕關節上的防護服。有些操作可能要戴口罩和眼罩。

　　11．警報

　　生物安全柜有發出1種或2種警報的功能。一當窗框移動時，警報會響，表明操作者將窗框移到一個不合適的地方去了，糾正以后警報解除。氣流警報表明柜中正常氣流運行模式中斷，對操作者的保護作用和對樣品防污染的作用減至zui低，存在危險。警報響時，應立即停止工作并迅速報告上級人員。作為制造商，在產品的使用說明書的操作部分應詳細論述這一內容，對有關人員使用生物安全柜的培訓材料中也應有此內容。

　　12．生物安全柜的認證

　　每臺生物安全柜功能的完整性和操作的有效性能都應作檢定。安裝時應按國 家或國際標準檢定，以后應根據制造商說明書定期由專職技術人員檢定。對生物安全柜使用有效性的評價應包括以下內容：功能完整性實驗，HEPA濾器密封性試驗，對向下氣流速度、正面氣流速度、負壓／換氣次數、氣流的煙幕模式，以及警報和互鎖系統進行測試。還可選擇漏電、光照度、紫外光輻射強度，噪音級別，振動性等試驗。檢測人員要經過專門的培訓，采用專門的技術和儀器設備。建議由有資質的專業人員來進行測試。