低溫,哪些稱作生物和醫藥學上的低溫。生物和醫藥學上的低溫,是個較為寬的溫度范疇。從大部分酶的適宜反映溫度37℃下列到好多個K(開爾文),能夠稱之為低溫(絕對零度為-273.15℃ 即0K)。文中從樣品儲存的視角,將小于常溫下(室內溫度,25℃上下)的溫度了解為低溫。低溫能抑止植物體的生物化學主題活動,它是大自然具有的物理學規律性。依據阿侖尼烏斯(Arrhenius)式子,溫度越低,放熱反應速率變慢,樣品的儲存時間越長。因而,以便使微生物樣品在必須的時間內長期保持,大家按不一樣要求將樣品儲存在4℃,-20℃,-80℃ 或溫度更低的電冰箱中,或是儲存在液態氮中。文中談一談微生物樣品低溫儲存特別是在是凍存時必須留意的某些難題。
1. 長期性儲存的機構樣品要盡早凍存
樣品存貯的溫度對合理儲存時間的危害挺大。挑選適合的存貯方法和存貯溫度很關鍵。但為了確保試驗結果的普遍性,學術研究還要充足留意樣品在存貯或固定不動前的處理時間和方法。樣品從剛開始感受到固定不動或低溫儲存前這一段時間,仍有某些生物化學全過程在迅速地開展。這種生物化學反映的速率直至樣品被固定不動或是低溫儲存時才明顯減少。這過段時間越少越高。針對手術治療摘除的機構,熱缺血性(warm ischemia)時間越少越高;針對實驗動物,處決抽樣時掙脫時間越少越高。這有利于避免因自然環境更改而造成基因的表達水準或蛋白質磷酸化情況造成很大轉變。某些較繁雜的手術治療將會開展幾小時乃至一天到晚,那麼最開始被激光切割但未被切離的那一部分機構將會親身經歷較長的熱缺血性時間,可能會導致很大的生物化學轉變。以便盡量減少熱缺血性的危害,某些診室專業置放了液氮容器,機構如果切下來就被資金投入液態氮開展急凍(snap freezing);針對用時較長的手術治療,許多人先往短期內內切下來有象征性的小一部分機構用以科學研究,隨后再開展用時較長的摘除;許多人在標準不足時,選用了將熱缺血性情況變為冷缺血性(cold ischemia )情況的方法降低樣品的轉變。她們先把切下來的機構放置雪上或4℃ 電冰箱中置放短期內,便捷時再將樣品放置-80 ℃電冰箱或液態氮儲存。換句話說,從樣品剛開始收集到被凍存或固定不動,這一段時間越少越高,通常不必超出20分鐘。或許不一樣機構生物化學全過程的轉變速度有區分。當機構趕不及凍存時,可將其裁成一塊塊,放在機構儲存液如RNAsafety?中。
2. 樣品凍存的優點和缺點
對比于FFPE樣品,凍存機構的DNA 和RNA的得率高,片斷長,性價比高。可用以基因芯片和全新測序等高通量基因組學檢驗。有別于FFPE樣品,凍存機構內的蛋白(如酶類)依然維持微生物特異性,可用以一些檢驗。但對凍存樣品,必須留意某些難題。凍存機構的形態學檢驗實際效果有時候比不上FFPE樣品細致、極致(比如用以免疫力組織化學檢驗時);一些病理學機構內的某些傳染性系數凍存后依然維持特異性,解決這種樣品時必須分外留意;機構樣品中的RNA在-80℃ 凍存時依然并不是長期性平穩的,許多人觀查到5年之后RNA出現溶解;核苷酸、蛋白等生物大分子歷經不斷凍融循環,有將會破裂成較小片斷;凍存能耗較多,必須較多專業的室內空間,成本費昂貴;當凍存機器設備產生常見故障時,大量寶貴的樣品有將會被毀壞,可能會導致極大的損害;若用液態氮凍存樣品時,也要預防凍傷、液氮容器發生爆炸及因室內空間密閉式等造成室息等風險性。
3. 凍存溫度的挑選
前已述及,依據通常的物理學規律性,溫度越低,樣品的平穩時間越長。在超低溫冰箱問世以前,-20℃ 電冰箱是常見的低溫存貯專用工具其一。實踐經驗,-20℃ 時機構內的生物大分子依然能夠被溶解。并且,0至-60℃ 是水的結晶體溫度。結晶體非常容易對體細胞和機構的外部經濟構造導致損害,通常沒有這一溫度范疇來儲存機構和體細胞。某些歷經純化的生物大分子能夠在這里一溫度范圍之內短期內儲存。現階段,大部分微生物和醫學臨床研究組織用-80℃ 電冰箱或液態氮凍存微生物樣品。-80℃小于不良影響很大的結晶體溫度范疇,都是常見機器設備超低溫冰箱能超過的溫度。但在-80℃溫度下,不一樣的微生物樣品的儲存時間不相同的。機構中的DNA能夠在-80℃下能夠維持多年或更長期。機構中的RNA在-80℃下的可靠性隨不一樣機構或體細胞而異,但通常不超出5年。
微生物樣品的低溫儲存,是現階段微生物樣品的關鍵儲存方法。在哪兒一溫度下開展儲存,必須融合樣品自身的特性及試驗目地來明確。通常情況下,機構樣品內的生物大分子比提純后的生物大分子不平穩,RNA比DNA容易溶解。機構樣品、體細胞樣品的快速收集、快速凍存或固定不動針對儲存生物大分子的一致性很關鍵。在開展樣品的低溫儲存時,加上微生物樣品儲存液,比如RNAsafety?系列產品有機化學保護膜,能夠協助減緩生物大分子的溶解系統進程,獲得比較理想的科學研究結果。
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