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  • 發布時間:2018-07-25 18:28 原文鏈接: 生物芯片制備

    載體材料及要求

    作為載體必須是固體片狀或者膜、表面帶有活性基因,以便于連接并有效固定各種生物分子。目前制備芯片的固相材料有玻片、硅片、金屬片、尼龍膜等。目前較為常用的支持材料是玻片,因為玻片適合多種合成方法,而且在制備芯片前對玻片的預處理也相對簡單易行。

    載體種類

    玻璃片、PVDF膜、聚丙烯酰氨凝膠、聚苯乙烯微珠、磁性微珠。

    點樣機點樣機

    生物樣品的制備

    分離純化、壙增、獲取其中的蛋白質或DNA、RNA并用熒光標記, 才能與芯片進行反應。用DNA芯片做表達譜研究時,通常是將樣品先抽提MRNA,然后反轉錄成CDNA。同時摻入帶熒光標記的dCTP或dUTP。

    芯片制備方法

    包括原位合成和預合成后點樣。

    原位合成:適用于寡核苷酸,通過光引導蝕刻技術。已有P53、P450,BRCAI/BRCA2 等基因突變的基因芯片。

    預合成后點樣:是將提取或合成好的多肽、蛋白、寡核苷酸、cDNA、基因組DAN等通過特定的高速點樣機器人直接點在芯片上。該技術優點在于相對簡易低廉,被國內外廣泛使用。

    接觸式點樣:是指打印針從多孔板取出樣品后直接打印在芯片上。打印時針頭與芯片接觸。優點是探針密度高,通常一平方厘米可打印2500個探針。缺點是定量準確性及重現性不太好。

    非接觸式點樣:針頭與芯片保持一定距離。優點是定量準確重現性好,缺點是噴印的斑點大,密度低。通常一平方厘米只有400點。但是日本佳能公司能把噴印點直徑大小由150-100μm降到30-25μm。可將哺乳動物整個基因組DNA點陣于一張芯片上成為可能。


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