用[α-32P] 3'脫氧腺苷5'-三磷酸或[α-32P]雙脫氧ATP末端標記雙鏈DNA的3'突出端
實驗材料 限制性內切核酸酶小牛胸腺末端轉移酶模板 DNA
試劑、試劑盒 乙酸銨乙醇酚氯仿末端轉移酶緩沖液
儀器、耗材 Sephadex G-50 離心柱
實驗步驟
一、材料
1. 緩沖液和溶液
乙酸銨（10 mol/L )
乙醇
酚：氯仿（1:1，V/V)
2. 酶和緩沖液
適當的限制性內切核酸酶
小牛胸腺末端轉移酶
5X 末端轉移酶緩沖液
3. 核酸和核苷酸
模板 DNA ( 0.1~5 μg）
4. 放射性化合物
[α-32P] 3' 脫氧腺苷三磷酸（10 mCi/ml，比活性 5000 Ci/mmol)
或
[α-32P] 雙脫氧 ATP ( 10 mCi/ml，3000 Ci/mmol)
5. 專用設備
Sephadex G-50 離心柱，用 TE ( pH 7.6) 平衡
二、方法
1. 用適當的限制性內切核酸酶消化 0.1~5 μg 模板 DNA。
2. 用酚：氯仿抽提及標準乙醇沉淀純化 DNA。
3. 將消化的 DNA 溶于 10 μl 5X 末端轉移酶緩沖液和 34 μl 水中。
4. 加入 5 μl 10 mCi/ml [α-32P] 3' 脫氧腺苷 5'-三磷酸（5000 Ci/mmol）或 [α-32P] 雙脫氧 ATP ( 3000 Ci/mmol) 和 1 μl 牛胸腺末端轉移酶（約 20 單位）。
5. 37℃ 溫育反應 1 h。
6. 用 Sephadex G-50 離心柱層析或在 2.5 mol/L 乙酸銨的存在下進行兩輪乙醇沉淀，以分離標記的 DNA 與未摻入的 [α-32P] 3' 脫氧腺苷 5'-三磷酸（或 [α-32P] 雙脫氧 ATP）。