用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗

ATP儲存液

一、Mg-ATP 儲存液的配制

ATP 買來時通常是鈉鹽。大多數激酶需要 ATP 鎂鹽作為高效底物。有時可以用錳代替鎂。

1. 20 mmol/L MgCl₂ 或 MgSO₄

2. 20 mmol/L Na₂-ATP

以 1:1 的比例混合這兩種溶液，測 pH 值。慢慢將 pH 值調至 pH 7.4。如果出現沉淀，應繼續攪拌，并要保持 pH 值在 pH 7.4。這就配成了 10 mmol/L 的 Mg-ATP 儲存液。將溶液分成小份保存于 -20℃，可以放一年以上。

二、[γ-³²P] ATP 使用液的配制

[γ-³²P] ATP 供應商有 Amersham Int、NEN 和 ICN；通常可以買到不同比活性的 [γ-³²P] ATP。適宜使用的比活性是 3000 Ci/mmol，通常剛買來時的濃度是 10 mCi/ml。Amersham’s Rerfivue [γ-³²P] ATP 溶液用起來很方便，因為它可以保存于 4℃ 而不是 -20℃。