基本方案
實驗方法原理 | |
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實驗材料 | 抗體 β-半乳糖苷酶 |
試劑、試劑盒 | MBS 溶液 MgCl2 NaCl 2-巰基乙醇 二硫丁四醇 |
儀器、耗材 | 交聯葡聚糖 G-25 色譜柱 |
實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」 在 1 ml 抗體溶液中加入 1 ul MBS 溶液,25℃ 放置 1 h。未結合試劑由交聯葡聚糖 G-25 色譜柱除去,用緩沖液洗脫。立刻在收集的蛋白質組分(280 nm 下測定吸收值)中加入 2 mg β-半乳糖苷酶,30℃ 下放置 1h。用 50 ul/ml 0.1 mol/L 二硫丁四醇停止反應。
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注意事項 | |
其他 |
試劑: MBS 溶液(3-來酰亞胺基苯酰-N-羥基丁二酰亞胺酯,Mr=314.3;20 mg/ml 二氧六環) 抗體溶液(IgG,1 mg/ml 溶于 0.05 mol/L NaCl,0.1 mol/L 磷酸二氫鉀 pH 7.0) β-半乳糖苷酶(來自 E.coli) 交聯葡聚糖 G-25 色譜柱,約 1 cm×30 cm,用 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸二氫鉀平衡 10 mmol/L MgCl2,50 mmol/L NaCl 1 mol/L 2-巰基乙醇(Mr=78.1;0.78 g/10 ml) 0.1 mol/L 二硫丁四醇,(DTE,Mr=154.2,154 mg/10 ml)
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