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  • 發布時間:2019-09-13 16:01 原文鏈接: 由MBS將半乳糖苷酶與抗體的結合實驗

    • 基本方案

               

    實驗方法原理
    實驗材料

    抗體 β-半乳糖苷酶

    試劑、試劑盒

    MBS 溶液 MgCl2 NaCl 2-巰基乙醇 二硫丁四醇

    儀器、耗材

    交聯葡聚糖 G-25 色譜柱

    實驗步驟

    實驗所需「試劑」具體見「其他」


    在 1 ml 抗體溶液中加入 1 ul MBS 溶液,25℃ 放置 1 h。未結合試劑由交聯葡聚糖 G-25 色譜柱除去,用緩沖液洗脫。立刻在收集的蛋白質組分(280 nm 下測定吸收值)中加入 2 mg β-半乳糖苷酶,30℃ 下放置 1h。用 50 ul/ml 0.1 mol/L 二硫丁四醇停止反應。

             
    注意事項
    其他

    試劑:


    MBS 溶液(3-來酰亞胺基苯酰-N-羥基丁二酰亞胺酯,Mr=314.3;20 mg/ml 二氧六環)


    抗體溶液(IgG,1 mg/ml 溶于 0.05 mol/L NaCl,0.1 mol/L 磷酸二氫鉀 pH 7.0)


    β-半乳糖苷酶(來自 E.coli)


    交聯葡聚糖 G-25 色譜柱,約 1 cm×30 cm,用 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸二氫鉀平衡


    10 mmol/L MgCl2,50 mmol/L NaCl


    1 mol/L 2-巰基乙醇(Mr=78.1;0.78 g/10 ml)


    0.1 mol/L 二硫丁四醇,(DTE,Mr=154.2,154 mg/10 ml)

    展開 


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