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  • 發布時間:2020-08-17 16:49 原文鏈接: 由NAD+還原反應測定OGDHC總活性的實驗

    實驗方法原理


    實驗材料 OGDHC

    試劑、試劑盒 磷酸鉀NAD+焦磷酸硫胺素MgCl2α-酮戊二酸二硫赤蘚糖醇輔酶 A

    儀器、耗材 分光光度計

    實驗步驟

    實驗所需「試劑」具體見「其他」


    0.98 ml 實驗混合物


    0.02 ml 酶樣品


    37 ℃ 時,于 340 nm 處吸收值發生變化,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。


    注意事項

    其他

    試劑:


    0.1 mol/L 磷酸鉀,pH 7.6


    0.1 mol/L NAD+(游離酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素(ThDP,脫羧輔酶,Mr=460.8,46.1 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.1 mol/L MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3,203 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.5 mol/L α-酮戊二酸(α-酮戊二酸鹽,2-氧代戊二酸,二鈉鹽,Mr=190.1,0.95 g 溶于 10 ml 水中)


    0.1 mol/L 二硫赤蘚糖醇(DTE,Mr=154.2,或二硫蘇糖醇,DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.01 mol/L 輔酶 A(游離酸,Mr=767.5,CoA·Li3,Mr=785.4;23 mg 溶于 3 ml 水中)


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