1 治療白血病 通常成人口服2.5mg～10mg/日，總量約50mg～150mg。兒童1.5mg～5mg/日。
2 治療絨毛膜上皮癌等 10mg～20mg/日，肌注或口服，亦可作靜滴，連用5～10日，療程量為80mg～100mg。3 治療頭頸部癌或婦科癌 10mg～20mg/次，動脈插管給藥，每日或隔日1次，7～10次為1療程。
4 治療一般實體瘤 肝、腎功能正常者，30mg～50mg/次，靜注，5～10日1次，5～10次為1療程；也可每次0.4mg/kg，靜注，每周2次。
5 解救療法 先靜注長春新堿1mg～2mg/次，半小時后，用甲氨蝶呤1g～5g/m 2，靜滴6小時。4～6小時后開始肌注甲酰四氫葉酸鈣，6mg～12mg(～15mg)/次，以后每6小時肌注1次，用到72小時。依情況可每月用藥1次。
注：患者必須在醫生的指導下用藥，以免造成慘劇。特別是類風濕關節炎，銀屑病等免疫病患者切記！