照高效液相色譜法(通則0512)測定。
避光操作。供試品溶液取本品20片,精密稱定,研細,精密稱取適量(約相當于甲狀腺粉65mg,約含左甲狀腺素38g),置預先充有氮氣的帶螺帽試管中,盡量減少在空氣中暴露的時間,精密加入蛋白水解酶溶液[稱取氯化鈉6.435g、三羥甲基氨基甲烷4.846g和他巴唑5.708g,置1000ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,必要時用6mol/L鹽酸溶液或0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至8.4±0.05,作為還原性緩沖溶液。
臨用前,取鏈霉蛋白酶(P5147)適量,加還原性緩沖溶液溶解并稀釋制成每1m中含鏈霉蛋白酶lmg的溶液]5ml。緩緩通入氮氣流5分鐘,蓋上螺帽,搖勻,置帶蓋的水浴中,于37℃±1℃水解28小時,期間不時檢查混合物分散情況,必要時搖勻。精密加入1%磷酸乙腈溶液2ml,振蕩,以每分鐘2000轉離心5分鐘。取上清液濾過,取續濾液。對照品溶液、色譜條件、系統適用性要求與測定法見甲狀腺粉含量測定項下。