病毒是具有生物活性的最小微生物，由于其結構復雜，各種類型的病毒對物理、化學作用的反應有所不同（溫度、 pH 、鹽類等）。保存病毒首先必須了解各種病毒的性質，才能恰當的選擇保存劑和保護方法。來源：《病毒學檢驗》
| 實驗方法原理 | 含水物質首先經過冷凍，然后在真空中使水分升華，干燥，在這種低溫、干燥和缺氧環境下，微生物的生長和代謝暫時停止，因而保存期較長，便于運輸。該法需要凍干機等設備，并需保護劑。保護劑一般采用脫脂牛奶或血清等。保護劑的作用機理是在冷凍干燥的脫水過程中穩定病毒結構，防止細胞膜受冷凍或干燥而造成損傷。真空凍干病毒比較穩定，可于室溫短期保存， 4~8℃長期保存。此法綜合利用了各種有利于毒種保存的因素，具有成活率高，變異性小等優點，是常用的較理想的毒種保存方法之一。 |
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| 實驗材料 | 待保存病毒 |
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| 試劑、試劑盒 | 保護劑95% 乙醇 |
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| 儀器、耗材 | 安瓿管真空泵 |
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| 實驗步驟 |
1. 準備安瓿管。市售的安瓿有直管式的，也有底部為球形的球式安瓿，也可選用中性硬質玻璃自制安瓿管。安瓿管清潔后，將標有病毒的標簽放人安瓿管內，高壓滅菌后備用。
2. 制備保護劑。凍于菌種的保護劑種類很多，常用脫脂牛奶，可配成 20%乳液，分裝，高壓滅菌，并作無菌試驗。
3. 制備病毒懸液。吸取 3 ml 無菌牛奶加入毒種，輕輕搖動，再用手搓動試管，制成均勻的病毒懸液。
4. 分裝及預凍。用無菌的長頸滴管將病毒懸液分裝于安瓬管底部，每管裝 0. 2 ml 。將安瓬管上端燒熔成細頸，將安瓬整個浸入裝有干冰和 95% 乙醇的預凍槽內，槽內溫度約為- 50℃~- 40℃, 可使懸液凍結成固體。
5. 真空干燥。完成預凍后，開動真空泵抽氣，氣壓降至 133. 3 kPa 以下，維持凍結劑可于 4 h后移去，繼續于室溫中抽氣，達到完全干燥。
6. 封管。待毒種完全干燥后即從干燥缸內取出安瓿瓶，置于抽氣管上抽成真空，約需 3~10 min。用高頻真空檢測儀檢查后，置 4℃冰箱保存。 展開 |
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| 注意事項 |
1. 一般病毒應保藏于低溫、清潔和干燥的地方。
2. 毒種操作必須在無菌條件下進行，防止污染。
3. 對于已發生變異的病毒，可通過接種易感動物將具有毒力的病毒重新選擇出來，該法還可同時使一些表型變異的病毒恢復原有特性。
4. 實驗室用培養基保存毒種時，應保存兩套，一套供保存傳代，另一套供日常應用。
5. 病毒株的保存需有專人負責，同時有專門的記錄薄，記錄的內容有：①毒株的名稱及數量；②毒株的來源（研究室名、時間、毒株從何種材料上分離、傳代于何種動物、傳代數、分離情況等）；③本實驗室傳代的情況（傳代者姓名，傳代的代數，傳代后的保存方法及保存數量）④保存毒種的容器（安瓶、玻璃試管、塑料凍存管等）；⑤毒株的保存性質（組織塊、懸液、液體或凍干）；⑥毒株的毒力；⑦保存年、月、日。 展開 |
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