實驗方法原理
實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒
試劑、試劑盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶
儀器、耗材 Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱
實驗步驟
1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細胞計數。
2. 將 5×105 個細胞室溫 1800 g，離心 5 min，棄上清。
3. 將細胞懸浮于 25 ml 37℃ 完全 MEM-10 培養基中，放入 150 cm2 組織培養瓶中，將其放入 5% CO2 加濕培養箱中 37℃ 培養過夜。同樣，也可使用 150 cm2 組織培養瓶中貼壁培養的單層細胞（見「細胞培養實驗」基本方案 1），直接進行步驟 4。
4. 在使用前，將一定體積的痘苗病毒儲液與 0.25 mg/ml 胰酶混合，渦旋混勻。在 37℃ 水浴鍋中保溫 30 min， 并在保溫過程中每隔 5～10 min 渦旋混勻一次。
病毒儲液的滴度常常在 2×109 pfu/ml 左右，但根據其來源的不同病毒滴度也可能低一些。
如果經過渦旋混勻后，還可以看見團狀物，將其冷卻到 0℃ 并在冰上超聲波作用 30 s。此步驟可重復多次，但在兩次超聲波作用之間，樣品一定要置于冰上冷卻。
5. 用完全 MEM-2.5 培養基將胰酶作用后的病毒稀釋到（2.5～7.5）×107 pfu/ml。吸出 150 cm2 組織培養瓶中的培養基，加入 2 ml 稀釋的、胰酶作用后的病毒。放入 CO2 培養箱中 37℃ 培養 2 h， 每隔 30 min 用手輕輕搖動培養瓶。
6. 加入 25 ml 完全 MEM-2.5 培養基覆蓋細胞，放入 CO2 培養箱，37℃ 培養 3 天。
7. 將培養瓶中被感染的細胞轉移到無菌的塑料管中，在 5～10℃，1800 g 離心 5 min，棄上清。
8. 將細胞用 2 ml 完全 MEM-2.5 培養基重懸（每 150 cm2 組織培養瓶），用吸管輕輕吹吸或渦旋混勻。
9. 用反復凍融的方法裂解細胞懸液：用干冰/乙醇冷凍細胞，37℃ 水浴及渦旋解凍，如此進行 3 次。
10. 將病毒儲液放置在冰上，并將其獨立分裝成小份，每份 0.5～2 ml，放入 -70℃ 保存。
注意事項
每孔中有 20～80 個噬斑一般可以取得較好的結果，在測定滴度時，可以考慮用胰酶對病毒儲液進行 1:1 稀釋。