實驗方法原理
檢查白細胞移動抑制因子的存在,是借其抑制白細胞移動的生物活性為指標的,依觀察白細胞移動的方式不同,移動抑制試驗有三種不同的方法,即毛細管法,瓊脂糖打孔法及瓊脂糖微滴法,這里介紹毛細管法。
實驗材料 白細胞
試劑、試劑盒 細胞培養液Hanks液淋巴細胞提取液
儀器、耗材 毛細玻璃管蓋片離心機試管滴管
實驗步驟
1. 淋巴細胞提取。
2. 用無菌鑷子夾毛細管,插入細胞懸液中,使細胞懸液借毛細管現象進入毛細管內,在離上端7~8mm時,將毛細管取出,裝入各毛細管中,使細胞懸液高度力求相對等。
3. 將毛細管空端經火焰封固端朝下置試管中,于水平離心機內1000轉/5,10分鐘。
4. 取出毛細管可見細胞被壓緊里4~6 mm 高的柱,表層發白主要是白細胞,下層發紅為紅、白細胞混合存在。用小砂輪在毛細管壁的細胞——液體界面處劃痕,小心折斷。
5. 將溢滿細胞的毛細管蘸少許凡士林,置平底凹玻中固定,每凹放2~8只毛細管,而后滴加培養液,將毛細管分為兩組,每組3~4支,一組為實驗組,另一組為對照組。
6. 試驗組用199培養加適量抗原作培養液,對照組只用199液作培養液,不加抗原。
7. 凹孔上加蓋玻片封閉,勿留有氣泡,將凹玻片置于鋪有濕布紗布的鋁盒中,置37℃溫箱中培養18~22hr。
8. 取出凹玻片,用解剖顯微鏡測定各毛細管白細胞移動的扇面之長短直徑。試驗結果用移動指數MI表示:
9. 正常值80~120%。80%以下皆為抑制,即移動抑制陽性。120%以下皆為刺激,刺激反應的產生可能是抗原濃度偏低。