石蠟切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素T（thioflavine T）熒光染色試劑盒使用說明
主要用途
YIJI石蠟切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素T（thioflavine T）熒光染色試劑是一種旨在使用標準化的化學分離石蠟方法和硫磺素T染色技術，與淀粉樣蛋白結合，來分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中蘋果綠熒光現象的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的淀粉樣蛋白檢測。廣泛用于淀粉樣蛋白樣疾病的病理生理的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，熒光清晰。
技術背景
淀粉樣蛋白（AMYLOID）是一種同質性、嗜伊紅性（eosinophilic）、不溶性的纖維蛋白（fibrous protein）聚合體，具有共同的β交叉折疊層（β sheet）組織結構特征，沉積在細胞外。蛋白質錯誤折疊（misfolding），且異常自我聚集將導致淀粉樣變性（amyloidosis），細胞毒纖維沉積，產生組織損傷，進而引起23種不同淀粉樣蛋白綜合癥，超過400種疾病，包括阿茨漢姆癥、巴金森氏癥、II型糖尿病、白內障、朊病毒疾病等。淀粉樣蛋白斑（amyloid plaque）和神經纖維纏結（neurofibrillary tangles；NFT）是淀粉樣蛋白綜合征的病理性特征。硫磺素T（thioflavine T），陽離子苯并噻唑（benzothiazole）衍生物，在鹽酸的參與下，通過脫氫硫甲苯胺（dehydrothiotoluidine）的甲基化而成，是最常用的淀粉樣蛋白熒光探針，體內或體外識別顯示和定量分析纖維化動力學。較之硫磺素S（thioflavine S），硫磺素T更為穩定和廣譜，體內檢測更佳，尤其適合在液體狀態下檢測。一旦與淀粉樣蛋白纖維（寡聚體）結合，其熒光強度（激發波長440nm，散發波長490nm），顯著增強，呈現蘋果綠熒光。
產品內容
YIJI脫蠟液（Reagent A） 毫升（自備）
YIJI補水液A（Reagent B） 毫升
YIJI補水液B（Reagent C） 毫升
YIJI補水液C（Reagent D） 毫升
YIJI清理液（Reagent E） 毫升
YIJI染色液（Reagent F） 毫升
YIJI強化液（Reagent G） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存YIJI染色液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent F），避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月
用戶自備
小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟操作
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于組織細胞染色后觀察分析
實驗步驟
脫蠟處理
取出10片待測的石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，此步很重要）
（選擇操作）放進80℃烘箱，孵育30分鐘
（選擇操作）室溫下靜置15分鐘
按下表依次放進小染色缸里孵育
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染色缸 |
孵育時間 |
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xx毫升YIJI脫蠟液（Reagent A） |
15分鐘 |
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xx毫升YIJI脫蠟液（Reagent A） |
15分鐘 |
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xx毫升YIJI脫蠟液（Reagent A） |
15分鐘 |
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xx毫升YIJI補水液A（Reagent B） |
3分鐘 |
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xx毫升YIJI補水液B（Reagent C） |
3分鐘 |
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xx毫升YIJI補水液C（Reagent D） |
3分鐘 |
小心移去切片上的YIJI補水液C（Reagent D）
小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
室溫下孵育5分鐘
小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
二、樣本染色處理
小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent F），鋪滿整個切片樣品表面
室溫下孵育10分鐘，避免光照
小心移去切片上的YIJI染色液（Reagent F）
小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
室溫下孵育1分鐘
小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
小心加上xx微升YIJI強化液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
室溫下孵育10分鐘
小心移去切片上的YIJI強化液（Reagent G）
小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
室溫下孵育3分鐘
小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
封片
即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下（激發波長440nm，散發波長490nm）觀察：
淀粉樣蛋白：呈現蘋果綠熒光
注意事項
本產品為50次操作
操作時，須帶手套
石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，否則造成樣品支離破碎
試劑具有腐蝕性，注意操作安全
試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
組織細胞染色完成后，即刻進行熒光顯微鏡觀察
槲皮素（Quercetin）、姜黃色素（curcumin）、 藜蘆醇（resveratrol）等會干擾檢測