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  • 發布時間:2022-10-31 09:19 原文鏈接: 硫酸銨純化抗體的步驟

    以腹水或組織培養上清液為例來介紹抗體的硫酸銨沉淀。各種不同的免疫球蛋白鹽析所需硫酸 銨的飽和度也不完全相同。通常用來分離抗體的硫酸銨飽和度為 33% — 50% 。

    配制飽和硫酸銨溶液

    ( SAS ) 1.將 767g ( NH 4 ) 2 SO 4 邊攪拌邊慢慢加到 1 升 蒸餾水中。用氨水或硫酸調到硫酸pH7.0 。此即飽和度為 100% 的硫酸銨溶液( 4.1 mol/L, 25 ° C ). 2.其它不同飽和度銨溶液的配制

    沉淀

    1.樣品(如腹水) 20 000 ′ g 離心 30 min ,除去細胞碎片; 2.保留上清液并測量體積; 3.邊攪拌邊慢慢加入等體積的 SAS 到上清液中,終濃度為 1 : 1 ( 4.將溶液放在磁力攪拌器上攪拌 6 小時或攪拌過夜( 4 ° C ),使蛋白質充分沉淀

    透析

    1.蛋白質溶液 10 000 ′ g 離心 30 min ( 4 ° C )。棄上清保留沉淀; 2.將沉淀溶于少量( 10-20ml ) PBS -0.2g /L 疊氮鈉中。沉淀溶解后放入透析袋對 PBS -0.2g /L 疊氮鈉透析 24-48 小時( 4 ° C ),每隔 3-6 小時換透析緩沖液一次,以徹底除去硫酸氨; 3.透析液離心,測定上清液中蛋白質含量。 


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