堿性瓊脂糖凝膠電泳

DNA 樣品

瓊脂糖 堿性瓊脂糖電泳緩沖液 堿性凝膠載樣緩沖液 乙醇 溴化乙錠或 SYBR Gold 染色液 堿性瓊脂糖凝膠中和溶液 乙酸鈉 TAE 電泳緩沖液

玻璃板 水浴

一、材料

1. 緩沖液和溶液

瓊脂糖

10X 堿性瓊脂糖電泳緩沖液（500 mmol/L NaOH，10 mmol/L EDTA）

6X 堿性凝膠載樣緩沖液（300 mmol/L NaOH，6 mmol/L EDTA，18% (m/V) Ficoll-400 ( Pharmacia 公司），0.15%（m/V) 溴甲酚綠，0.25% (m/V)二甲苯氰）

乙醇

溴化乙錠或 SYBR Gold 染色液

堿性瓊脂糖凝膠中和溶液（1 mol/L Tris-Cl（pH 7.6)，1.5 mol/L NaCl）

乙酸鈉（3 mol/L pH 5.2)

1X TAE 電泳緩沖液

2. 核酸和寡核苷酸

DNA 樣品（通常放射性標記）

3. 專用設備

玻璃板

預置溫度 55℃ 的水浴



二、方法

1. 在三角燒瓶或玻璃瓶中加入準確量的瓊脂糖粉和定量的水制備瓊脂糖溶液。

2. 在燒瓶的瓶頸上輕輕地塞上 Kimwipes 紙。如用玻璃瓶，瓶塞須擰松。在沸水浴或微波爐中將混懸液加熱至瓊脂糖溶解。

3. 使清亮的溶液冷卻至 55℃。加 0.1 倍體積的 10X 堿性凝膠電泳緩沖液，迅速灌制凝膠。當凝膠完全凝固后，置電泳槽中，加入新配制的 1X 電泳緩沖液至恰好蓋沒凝膠。

4. 用常規乙醇沉淀的方法收集 DNA 樣品。加入 10~20 μl 1X 凝膠緩沖液溶解沉淀，再加 0.2 倍體積 6X 堿性凝膠載樣緩沖液。

5. 將溶于 6X 堿性載樣緩沖液的 DNA 樣品加至加樣孔中。以 <3.5 V/cm 的電壓開始電泳，當溴甲酚綠遷移 0.5~1 cm 時，關閉電源。在凝膠上面放置一塊玻璃板，繼續電泳至染料遷移了凝膠長度的近 2/3 時，停止電泳。

6. 根據實驗目的，按照下面介紹的程序之一處理凝膠。

(1) Southern 雜交

① 將凝膠放在中和溶液室溫浸泡 45 min。將 DNA 轉移至不帶電荷的硝酸纖維素或尼龍膜上。

② 通過相應的標記探針對膜上固相化的 DNA 進行雜交檢測。

(2) 染色

① 將凝膠放在中和溶液室溫浸泡 45 min。

② 用含 0.5 μg/ml 溴化乙錠的 1X TAE 或 SYBR Gold 染色液染中和過的凝膠。

濕膠的放射自顯彩：按下面專欄介紹的一種方法進行操作。