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  • 發布時間:2019-04-05 13:25 原文鏈接: 磷酸酶制備實驗——膜蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)

    試劑、試劑盒

    提取緩沖液

    儀器、耗材

    微型離心機Superose 6 柱子

    實驗步驟

    1. 用 1 ml 含有 1% NP-40 去污劑的提取緩沖液提取顆粒部分(按照上面組織/細胞的制備和提取所述方法準備)15 分鐘,用一個小勻漿器固定在微型離心管里勻漿或者通過微量移液器吸頭尖反復吸入和排出懸浮液以確保沉淀分散。

    2. 在 13000 g 的冷凍微型離心機中離心懸浮液 10 分鐘。

    3. 上清加到 1.0cm x 28 cm 的 Superose 6 柱子(Pharmacia) 上,柱子用含有 0.1% NP-40 的層析緩沖液平衡,并在 8 ml/h 的流速中洗脫,以 0.5 ml 為單位收集。PTP 以一個單峰緊隨排阻蛋白(空柱體積)之后,PTP 分子量大約為 150 kDa。PTP 可以通過測試或免疫印跡法檢測。

    4. 按照上面所述透析主要活性部分(總數為 3~4 ml),除了用提取緩沖液替代層析緩沖液外,溶液中不應含有氯化鎂。

    展開


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