神經功能行為、放射學及病理結果的變化研究實驗（一）

一種慢性頸段脊髓壓迫的大鼠模型的建立：神經功能行為、放射學及病理結果的變化

摘要：

頸髓病是由于脊柱退行變造成的脊髓的慢性部分受壓所致。不管怎么樣，慢性頸髓受壓的確切機制還沒有完全清楚。本研究的目的旨在建立一種有效的新的沒有錐板切除的慢性脊髓壓迫動物模型，來復制臨床過程。系在一塊塑料板上的聚乙烯線，用來綁在一個月大的大鼠的C4椎體上，纏繞三圈。術后，隨著椎管和椎體的生長，聚乙烯線逐漸長入椎管背側的骨頭里，而產生脊髓漸進性的壓縮。結果表明：在形成頸椎管狹窄9個月后，頸椎管狹窄模型的大鼠出現運動障礙和感覺障礙；然而，直到6個月才出現臨床癥狀。12個月后，70%的頸椎管狹窄模型大鼠出現了脊髓內高信號。在病理切片，在形成頸椎管狹窄12個月后脊髓整個周圍壓縮。運動神經元數目減少，白質顯示華勒氏變性。本模型也許能夠復制臨床慢性頸髓壓迫的特征性臨床特點，包括在潛伏期和隱形神經云減少后出現，進行性運動和感覺功能，以及代表了人類慢性頸髓壓迫。 

關鍵字：動物研究；行為評估；核磁共振；神經元死亡；脊髓損傷。 

引言：

一般認為，慢性壓迫脊髓病的病因與頸椎的病理特點相關，例如椎關節硬化，韌帶骨化，椎管狹窄，以及椎間盤突出，或許由機械性壓迫和血管病變兩種因素引起所致。慢性壓迫性脊髓病隱匿性地和進展性地損傷運動和感覺動能。很多病人數年沒有臨床癥狀，盡管這個時期內存在脊髓壓迫和缺陷，一旦本疾病出現臨床癥狀，神功功能障礙進行性加重，很少有逆轉。隨機選擇的有癥狀隊列的頸部核磁共振檢查的一項研究表明大于64歲的受試者26%出現脊髓損傷，45-64歲受試者16%出現脊髓損傷。臨床上，即使那些由神經影像學確診的嚴重，檢查經常顯示不可預料的非重要性神經功能發現，和手術減壓后的可觀的神經恢復也許是可以預料到。因此，慢性脊髓壓迫的一個急性脊髓損傷沒有的特點就是脊髓的可塑性。到目前為止，臨床上慢性頸髓術后效果在持續提高。不管怎樣，仍有一些不滿意的結果，即使是充分的減壓手術。這就意味著，頸髓嚴重受損以至于在病程中恢復性小。損傷過程的確切病理機制仍然不是完全清楚，但是灌注不足和血管栓塞已經被證實是可能因素。尸體標本的脊髓病理檢查發現，運動神經元減少以及灰質中的血管退行性變，以及脫髓鞘和軸索水腫。一個次病理情況的合適的模型應該展示壓縮引入后的隱匿性神經功能障礙的隱匿期，隨后進行性的功能障礙時期。進一步，做一個沒有脊髓損傷的模型具有重要意義。此研究的旨在產生一種新的脊髓慢性壓迫損傷模型，來滿足這些臨床條件，運用MRI和病理學檢查來評估運動感覺功能。

材料：

動物

本實驗在當地動物倫理委員會和本大學動物實驗監督條例以及日本政府動物保護和管理法規與日本政府飼養動物通知的監督下進行。實驗用27只雄性SD大鼠，3周大，平均體重51g。在溫度22度，濕度55%實驗室條件下飼養動物，同時能夠自由獲取飲水和食物。

頸椎管狹窄模型的制作

術前，動物在籠子中飼養一周，以適應環境。用戊巴比妥鈉腹腔內注射麻醉（35mg/kg)。每只大鼠均俯臥位置于加熱板上，手術在嚴格無菌條件下進行。體溫保持在37°C，血壓用無創血壓監護儀監護，以保持術中平穩的生理狀態。以C4棘突為中心，做一縱行皮膚切口，從錐板上鈍性兩側椎旁肌。暴露雙側錐板，在顯微鏡下分離出C4、C5根部，并切除。然后，切除C4棘突，實行椎板去皮質術。C4左側從側面牽拉到一側，聚乙烯通過C4椎體的腹側，固定在一塊1*2*0.5mm 大小的抵在C4椎體腹側上的塑料片上，然后纏繞三圈固定。在本模型中，隨著椎管和椎體的生長，聚乙烯線逐漸長入椎管的椎板里。因此形成漸進性的脊髓壓迫。對照組只進行C4C5椎板的暴露，不進行捆扎。對照組10只大鼠，控制組10只大鼠，術后繼續在以上描述的實驗室條件飼養12個月。

神經功能評價

BBB評分。術后1,3,6,9,12個月每組用BBB評分評價神經運動功能。BBB評分主要用于實驗性脊髓損傷后運動功能評價。簡言之，BBB是21分序列，從0（沒有后肢移動）到21分（持續協調的后肢運動）。0-7分為恢復的早期階段，8-13分描述恢復期的中間階段，14-21代表恢復的晚期階段，用階段性的腳趾頭的清理，主要爪子為止，步態穩定性，指甲位置。兩名檢查者觀察和評價每只大鼠4-min的運動。神經檢查運用雙盲技術。