點評實驗，有機會獲丁當獎勵
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來源：《神經生物學實用實驗技術》
基本方案
| 實驗方法原理 | 神經束路追蹤技術是研究神經元之間纖維聯系的最常用的方法，包括利用神經纖維損傷后發生潰變和神經元軸漿運輸原理來進行追蹤，而后者在各個方面存在明顯的優勢。常用的追蹤劑有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)、PHA-L、生物素葡聚胺(biotinylated-dextranamine, BOA)、霍亂毒素B(choleratoxin, CT)以及熒光素追蹤劑（如FG、Oil等）。各追蹤劑的具體原理可參考李云慶主編的《神經解剖學》。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 實驗動物 |
| 試劑、試劑盒 | 10%BOA |
| 儀器、耗材 | 5μL微量進樣器(Hamilton公司） 小鼠腦立體定位儀 電鉆 |
| 實驗步驟 |
1.小鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉后，用立體定位儀固定頭部。 2.頭頂部皮膚常規消毒，正中矢狀切開頭皮，依照小鼠圖譜坐標定位，顱骨鉆孔，在紋狀體部位用微盤進樣器徐緩注人0.5μL10%BDA溶液（溶于生理鹽水），5min內注射完畢，留針lOmin后緩慢退出。 3.動物存活7d后進行灌注固定，取出腦組織。 4.25%蔗糖脫水后，進行連續冠狀冰凍切片，片厚14μm,切片貼于包被明膠的載玻片上。 5將含黑質部位的切片分別入0.1MPBS中漂洗后，入含有辣根過氧化物酶－鏈霉卵白素復合物(0.1M PBS 1:500稀釋）中，孵育2h后進行DAB顯色。 6.脫水、透明，DPX封片。第5步也可以進行加入抗生物素的熒光二抗進行孵育，然后封片，用熒光顯微鏡觀察。BDA可用于順行和逆行追蹤，但順行追蹤的效果更好一些，可以很清楚地觀察到在中腦黑質部位棕色的DAB顯色陽性纖維和綠色熒光陽性纖維，可見，由BDA追蹤的神經纖維末梢形態比較清楚，可以觀察到由紋狀體向黑質的投射情況。
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| 注意事項 |
1.追蹤劑有順行和逆行之分，根據實驗目的選擇恰當的追蹤劑。 2.注射完追蹤劑后，動物存活的天數要根據追蹤神經通路的長短決定。
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| 其他 |
1.在立體定位注射過程中，微量進樣器要緩慢注入追蹤劑，注射完后要留針。 2.注射部位的準確度和注射劑量的多少直接決定注射追蹤劑的效果，新手需要多加練習，方能達到理想效果。 |
