種子生活力溴麝香草酚蘭（BTB）法鑒定實驗

實驗方法原理：

凡有生活力的種子能不斷地進行呼吸作用，吸收空氣中的O2，同時放出CO2，CO2溶于水生成H2CO3，H2CO3不穩定解離成H+和HCO3－。由于H2CO3不斷解離，就使周圍介質酸度逐步增加。用BTB測定出酸度的改變。BTB的分子結構式如圖：

它的變色范圍為pH6.0－7.6之間，它在酸性介質中呈黃色，在堿性介質中呈藍色，中間經過綠色（變色點為pH7.1）。

實驗材料：

玉米                                                                  

小麥種子

試劑、試劑盒：

BTB溶液                                                                 

BTB瓊脂凝膠

儀器、耗材：

恒溫箱                                                                 

培養皿                                                                 

鑷子                                                                 

濾紙                                                                  

藥物天平                                                                  

燒杯                                                                  

漏斗                                                                  

瓊脂                                                                  

BTB                                                                  

電爐                                                                  

量筒 

實驗步驟：

一、材料和設備

玉米或小麥種子

恒溫箱、培養皿、鑷子、濾紙、藥物天平、燒杯、漏斗、瓊脂、BTB、電爐、50  ml 量筒。

0.1%BTB溶液：稱取BTB 0.1克，溶解于煮沸過的自來水中，然后用濾紙濾去殘渣。濾液若呈黃色，可加數滴稀氨水，使之變為藍色或藍綠色，此液長期貯存于棕色瓶中。

1.5%BTB瓊脂凝膠：取0.1%BTB溶液40 ml 置于燒杯中，另稱取0.5克瓊脂，將其剪碎后加入杯中，用小火（電爐）加熱并不斷攪拌。待瓊脂完全溶解，稍稍冷卻即可趁熱倒入9cm 培養皿中，使之成一均勻的薄層，完全冷卻后備用。

二、實驗步驟

1．浸種：將待測種子在30℃－35℃溫水中浸種5小時左右，以增強種胚的呼吸強度。

2．顯色：取吸脹種子10粒，整齊地埋于備好的瓊脂凝膠中，注意要將胚埋入凝膠中。將培養皿置于35℃溫箱中一小時可見結果，兩小時以上結果更為明顯。觀察種胚周圍出現黃色暈圈的是活種子，否則是死種子。

3．計算：逐一數出種胚周圍出現黃色暈圈的種子數，并計算出有生活力種子的百分率。