在分子生物學研究中,基因的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前(2009年)用于測序的技術主要有Sanger等。發明的雙脫氧鏈末端終止法。Sanger法是根據核苷酸在某一固定的點開始,隨機在某一個特定的堿基處終止,產生A,T,C,G四組不同長度的一系列核苷酸,然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進行檢測,從而獲得DNA序列。Sanger測序法得到了廣泛的應用。
Sanger法測序的原理就是利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物,直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應構成,每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸,并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基團,使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止,終止點由反應中相應的雙脫氧而定。 [3]