第三屆全國生物質譜學術交流會隆重召開

發布時間：2010-05-16 06:26 原文鏈接：第三屆全國生物質譜學術交流會隆重召開

　　2010年5月15日上午10時許，由中國生物化學與分析生物學會蛋白質組學專業委員會、中國質譜學會生物質譜專業委員會和中國化學會分析化學委員會主辦，北京蛋白質組研究中心、復旦大學合蛋白質組學國家重點實驗室承辦的，蛋白質組數據處理暨第三屆全國生物質譜學術交流會在美麗的云南麗江古城盛大開幕。來自全國高等院校、科研機構、企事業單位的200余名從事蛋白質組學及其相關研究的專家學者出席了本次會議。

蛋白質組數據處理暨第三屆全國生物質譜學術交流會現場

北京蛋白質組學研究中心錢小紅研究員

　　本會會議主要圍繞蛋白質組學技術與應用、數據挖掘和生物質譜等方面的現狀和進展進行廣泛的交流和深入的探討。大會開幕式由北京蛋白質組學研究中心錢小紅研究員主持，出席開幕式的領導和專家有：中科院大連化學物理研究所張玉奎院士，復旦大學楊芃原教授，美國加州大學心血管研究中心Ping Peipei教授，軍事醫學科學院二所科技處王東根處長。

復旦大學楊芃原教授

　　楊芃原教授作為此次大會主席在致辭中說到，第一屆生物質譜研討會在復旦大學舉辦，第二屆生物質譜研討會于2002年在軍事醫學科學院舉辦。時隔8年，今天第三屆生物質譜會議在美麗的云南麗江召開。在2009年第六屆中國蛋白質組學大會期間，蛋白質組學專業委員會理事會議通過決定，將中國蛋白質組學大會由每年一屆改為每兩年一屆，中間年舉辦研討會，本次會議為專題研討會的首次嘗試。

　　近年來，生物質譜技術飛速發展，其應用范圍不斷擴大，而生物質譜技術在生命科學領域的應用，為蛋白質組研究發展注入了新的活力。隨著質譜的靈敏度、精確度、以及高通量的不斷發展，質譜在蛋白質組學中扮演著越來越重要的角色。楊教授指出就在開幕式之前舉行的973研討會上，各位專家對高精度質譜數據處理中的一些問題展開了探討。

　　楊教授最后指出，本次大會邀請了多位蛋白質組學領域的著名專家與會，相信一定能夠為我們帶來精彩的報告。并預祝在大會組委會、學術委員會和大會秘書處的共同努力下，在全體參會代表的大力支持下，此次學術交流會定能取得滿意的成果。

軍事醫學科學院二所科技處王東根處長

美國加州大學心血管研究中心 Ping Peipei教授

　　開幕式結束后，大家進行了集體合影。隨后多位著名國內外專家和教授做了大會報告，同大家一起探討了生物質譜技術領域當前的發展趨勢和最新研究成果，分別如下：

中科院大連化學物理研究所張玉奎院士

　　首先，由來自中科院大連化學物理研究所的張玉奎院士做了題為《蛋白質組研究分離和鑒定技術進展》的報告。報告中，張院士主要向大家介紹了該研究所在近年來發展的多種蛋白質組分離鑒定的新技術與新方法。

　　在高豐度蛋白質去除方面，發展了基于多維陣列液相色譜的通用型高豐度蛋白質去除技術；一次運行可去除58種高豐度蛋白質，并將樣品中蛋白質的鑒定數目提高2倍以上。此外，還發展了基于蛋白質印跡材料的高豐度蛋白質選擇性去除技術，如分級印跡技術。

　　在低豐度蛋白質富集方面，研制了多種固載金屬親和色譜材料，包括無機有機雜化整體材料、聚合物顆粒和介孔材料，以及金屬氧化物氣溶膠和復合金屬氧化物微球，實現了磷酸化肽的高選擇性富集。此外，在糖肽富集方面，采用點擊化學方法，在硅膠表面引入柔性麥芽糖功能基團；富集α-酸性糖蛋白酶解產物中的糖肽，共發現了146條糖肽，原文獻報道中僅發現了78條。

　　在高效分離新技術方面，針對蛋白質在基質上的殘留問題，研制了親水性微酶解反應器，實現了蛋白質組的在線快速酶解。通過與樣品預處理或在線酶解的集成，使得樣品預處理時間從30h縮短到7min，檢測限達6fmol以及5個數量級的動態范圍，不僅提高了系統的分析通量，而且提高了蛋白質鑒定的可靠性。同時還建立了陣列多維高效液相色譜、多維毛細管電泳和多維芯片毛細管電泳的分離方法。

　　在質譜高靈敏度鑒定方面，合成了新型磁性微納米材料，包括介孔涂層磁球、C8功能化介孔磁球等，提高了基體輔助激光解吸離子化質譜對蛋白質鑒定靈敏度。發展了針對磷酸化肽的衍生技術，可不經過富集，直接實現磷酸化肽的高靈敏度鑒定。

　　張院士最后指出，在定量蛋白質組學研究，功能蛋白質組學研究，蛋白質時空變化、結構鑒定和功能研究等方面的新技術與新方法，以及自主知識產權的新裝置、新儀器的研制都是未來蛋白質組學研究發展的方向。

Prof. Hisashi Narimatsu, Research Center for Medical Glycoscience, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Japan

Title: Development of glyco-biomarkers for liver fibrosis, and liver cancers and others using newly developed technologies for Glycomics

中國科學院北京基因組研究所劉斯奇研究員

　　中國科學院北京基因組研究所的劉斯奇研究員向大家介紹了《基于質譜的線粒體GST蛋白質組定性和定量分析》的報告。

　　劉老師介紹說到谷胱甘肽轉移酶(Glutathione S-transferases ，GSTs)是解毒酶的主要總科，可以通過還原型谷胱甘肽有效轉移親核化合物。然而，GSTs在糖尿病中的參與機理很少有人闡明。原因是缺少對GSTs線粒體的系統理解。劉老師首次提出了“線粒體GSTs蛋白質組”的概念，通過一種組合的方式，系統地研究了屬肝線粒體中的GSTs。采用親和色譜法或SDS-PAGE富集GST蛋白，使用MALDI Tof/Tof MS 或LC tandem MS/MS鑒別蛋白，研究結果表明，屬肝線粒體中存在5種GSTs，分別為GSTA3, GSTM1, GSTP1, GSTK1 以及GSTZ1。

　　為了對線粒體GSTs的相對豐度進行定量分析，采用了質譜結合免疫印跡的綜合分析方法。利用質譜對GSTs進行定性分析時，根據質譜譜圖的多反應監測(MRM)推斷GSTs結構。使用重組的GST蛋白作為標準物，建立了蛋白濃縮物的線性回歸方程和胰蛋白酶GST多肽的MS/MS強度，同時，通過校準估算出了鼠肝線粒體中的GSTs含量。在5中線粒體GSTs中，GSTP1含量最高，GSTZ1含量最少。通過對特定GSTs抗體的強度識別，使用免疫印跡對GSTs進行了定量分析。獲得了GST重組蛋白的5種單克隆抗體，將其用于GST濃度校準和免疫印跡強度分析。通過免疫印跡分析獲得的定性分析結果基本與MRM數據獲得的結果一致。

Prof. Hookeun Lee, Gachon University of Medicine and Science, Korea

Title: Mass Spectrometric Quantitative Proteomic Analysis: Roles of Microcapillary Liquid Chromatography

　　復旦大學張祥民教授

　　來自復旦大學的張祥民教授為大家帶來了題為《蛋白質水平的色譜分離與生物質譜鑒定新方法研究》的報告。

　　張教授所在課題組通過對液相色譜分離系統的優化，在實際蛋白質樣品考察優化了系統的分離性能，構建了液相色譜分離蛋白質鑒定方法與平臺。研制了蛋白水平富集預柱，并將其應用于蛋白質捕集。在離子交換色譜柱和反向色譜優化選擇上，實現了蛋白質分析所需的高分辨分離。色譜分離組分點樣至靶板上，利用發展的快速酶解技術完成蛋白質酶解，再通過MALDI-TOFTOFMS或LC-LTQMS進行蛋白質鑒定。該方法使得蛋白質的理論分離能力達到5000個以上，蛋白質組分能夠得到濃度信息，質譜鑒定可以同時利用肽指紋圖譜PMFs信息和串級序列信息，使得蛋白質鑒定的可靠性大為提高。

　　中國科學院大連化學物理研究所張麗華研究員

　　中國科學院大連化學物理研究所的張麗華研究員為大家介紹了有關《基于離子液體的新型膜蛋白質組預處理及分離鑒定技術》的報告。

　　張老師首先指出由于膜蛋白質，尤其是具有多個跨膜區的跨膜蛋白質，具有疏水性強、溶解性差、易沉淀、難酶解、含量低等特點，因此在采用通常用于可溶性蛋白質組分離鑒定的方法對膜蛋白質組進行研究時遇到了很大的挑戰。

　　張老師所在可以租發展了一種基于離子液體的膜蛋白質樣品處理方法，該方法具備對膜蛋白溶解能力強、與酶的生物相容性好、熱穩定性高以及質譜鑒定前容易去初等優勢。通過對鼠腦膜蛋白和人肝微粒體組分蛋白質表達譜的分析結果表明，離子液體不僅可以提高膜蛋白的溶解性，而且不用影響后續酶解過程中酶的活性。此外，在樣品進入質譜鑒定前，易于在除鹽步驟去除，不會影響質譜鑒定。與其他膜蛋白質組研究中常用的增溶劑相比，離子液體在膜蛋白質組樣品預處理中表現出明顯的優勢。

　　軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所張養軍副研究員

　　來自軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所的張養軍副研究員為大家介紹了關于《多層鍵合磷酸鋯開管毛細管柱的制備及及其在磷酸肽富集分析中的應用》的報告。

　　張老師在報告中主要介紹了一種利用鍵合磷酸鋯開管毛細管柱的制備及用于快速富集磷酸肽的新方法。對該多層開關毛細管柱的富集條件的優化結果表明，當開管柱長度為50 cm時，標準磷酸肽的進樣流速在0.3μL/min -0.5μL/min時，均有很好的富集效果。并且在同樣的流速條件下，使用不同內徑的多層開管柱進行富集時，富集效果沒有顯著性差異。該富集方法對磷酸肽有較高的選擇性，且檢測限達到10^-9M。

　　陸豪杰教授復旦大學

　　題目：糖蛋白組的富集和定量新技術

晏光榮副研究員暨南大學生命與健康工程研究院

題目：基于質譜技術的天然產物genistein調控的抑癌磷酸化信號通路構建

中國科學院生物物理研究所楊福全研究員

　　來自中國科學院生物物理研究所的楊福全研究員為大家帶來了題為《C18預分離和TiO2富集在蛋白質磷酸化研究中的應用》報告。

　　楊老師指出該研究利用反相C18色譜分離作為蛋白質酶解肽段的預分離方法，有效地提高了IMAC- TiO2磷酸化肽段富集方法的效率。采用該策略結合2D-LC-MS/MS多維蛋白質鑒定技術，對大鼠L6肌管細胞的磷酸化蛋白質組進行了鑒定分析，一共得到超過2200個磷酸化肽段，既證實了反相C18色譜可以作為一種預分離方法來提高磷酸化肽段的富集效率，同時這也代表了目前最大規模的肌管細胞磷酸化蛋白質組的分析。

　　此外，利用反轉數據檢索的策略，在已有的SEQUEST檢索打分值的基礎上，引入了磷酸化肽段MS/MS質譜圖的基峰強度和磷酸化肽段的保留時間作為數據篩選的參數，提高了鑒定結果的可靠性。

李巖博士美國約翰霍普金斯大學

　　題目：應用糖蛋白質組學和糖組學的方法篩選癌癥分子標記物

上海交通大學系統生物醫學研究院張延研究員

　　來自上海交通大學系統生物醫學研究院的張延研究員介紹了有關《蛋白質的O-糖基化修飾研究》的報告。

　　張老師首先指出糖鏈修飾是一種重要的蛋白質翻譯后修飾，細胞內50%以上的蛋白質都有糖鏈修飾。糖鏈參與了細胞識別、細胞分化、發育、信號傳導、免疫應答等各種重要生命活動。人類重大疾病如神經退行性疾病、心血管疾病、代謝性疾病、免疫性疾病以及腫瘤等均伴隨有蛋白質糖基化異常的發生。因此蛋白質的糖基化修飾研究是蛋白質組學研究的重要內容。張老師主要通過研究 O-GalNAc糖基轉移酶的糖基化修飾特性，通過利用UDP-GalNAc衍生物糖探針的熒光標記技術，結合質譜及多肽蛋白質芯片技術，建立了一種高通量發現蛋白質O-糖基化的新策略。

南京大學化學化工學院梁靚老師

　　來自南京大學化學化工學院的梁靚老師介紹了題為《用于糖蛋白富集的團隊硼親和方法研究》的報告。

　　目前用于糖蛋白富集的主要方法有凝集素親和法、肼化學法、親水作用色譜法和硼親和色譜法等。硼親和方法與其他幾種方法相比較具有三個顯著的優點：1)共價結合，專一性好，親和力強；2)可逆反應，結合/解吸過程容易控制；3)在酸性條件下解吸，解吸條件的質譜兼容性好。這些優點使得取代硼酸是非常理想的親和配基，特別適合于以質譜為核心的蛋白質組學分析方法。然而，常規的取代硼酸具有兩個明顯的缺點：1)在中性pH下的親和能力極弱，必須在堿性pH下才能與順式二羥基化合物結合，這造成了操作上的不便，增加了樣品變性的危險；2)在堿性pH時取代硼酸帶負電，與樣品及樣品基體間存在靜電相互作用，因而導致專一性的下降。

　　為了同時解決以上兩個問題，梁老師所在課題組提出了“團隊硼親和”的原理以及相應的方法。利用該方法制備了團隊硼親和磁性納米顆粒和團隊硼親和MALDI靶板，其優異的親和力和專一性得到驗證，成功實現了在中性pH條件下對糖蛋白的專一性富集和純化。